Guia de Farmacologia 2013-II

1 ASIGNATURA DE FARMACOLOGÍA GUÍA DE PRÁCTICA TERCER AÑO ACADÉMICO 2013-II Dr. BENJAMÍN CASTAÑEDA CASTAÑEDA Jefe de la Asignatura Dr. ALBERTO SALAZAR GRANARA Coordinador de Prácticas Dr. SALOMÓN AYALA PIO Profesor de Prácticas Mg. ANGEL ALVARADO YARASCA Profesor de Prácticas Dr. FABRICIO GAMARRA CASTILLO Profesor de Prácticas Dr. JOSEPH SÁNCHEZ GAVIDIA Profesor de Prácticas Dra. CAROLINA ZIMIC ZARE Profesor de Prácticas Dra. ANA LUCIA TÁCUNA CALDERÓN Profesor de Prácticas "Si me dices………… LO ESCUCHO Si lo veo…………… LO RECUERDO Si lo hago………….. LO APRENDO” CONFUCIO 2 NORMAS PARA EL TRABAJO ADECUADO EN LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA. 1. Ingresar al laboratorio puntualmente. 2. Si llega tarde, por respeto y norma, no ingrese ni interrumpa el proceder del laboratorio. 3. No entrar al Laboratorio con mochilas o bolsas. 4. El material autorizado, para ingreso al laboratorio comprende: A) Guía de prácticas. B) Calculadora. C) Cuaderno de apuntes. D) Libros. E) Laptop o Tablet. F) Útiles de escritorio (lápiz, lapicero, regla, borrador). G) Libreta de Control. H) Grabadoras de Audio y/o video. I) Cronómetro. 5. Tener puesto el mandil blanco antes de entrar a la clase práctica. 6. Usar guantes estériles y mascarillas para la manipulación de animales de experimentación. 7. Modular el ruido en el laboratorio. 8. Evitar el uso de colonias o sustancias que expelen olores fuertes. 9. No toser, ni estornudar sobre los animales de experimentación. 10. Manipular los animales de experimentación con suavidad, manteniendo la ética, siguiendo las pautas de las buenas prácticas de laboratorio. 11. Una vez ingresado al Laboratorio, no puede salir hasta el término de la práctica, salvo casos de emergencia y autorización de su jefe de práctica. 12. Tener apagado el teléfono celular durante la práctica. 13. No retirar los bancos del Laboratorio. 14. No comer durante la práctica. 15. Si rompen o pierden materiales de vidrio, devolverlos en el lapso de 1 semana, de la misma calidad y marca. 16. No pararse sobre los bancos o sillas de laboratorio. 17. No pararse sobre las mesas de trabajo del laboratorio. 18. No sentarse sobre las mesas de trabajo del laboratorio. 19. No sentarse en las escaleras del pabellón de los Laboratorios de práctica. 20. No hacer ruido en las escaleras ni el espacio de espera del pabellón de los Laboratorios de práctica. CALENDARIZACIÓN DE LAS PRÁCTICAS DE FARMACOLOGÍA MES FECHAS Nº DE P. TÍTULO DE LA PRÁCTICA Agosto 1. Informativa Información general de las directivas para el desarrollo de las prácticas de laboratorio. Agosto 5, 6, 7, 8. 1ª Factores que modifican los efectos de los fármacos Agosto 12, 13, 14, 15. 2ª Sinergismos y Antagonismos Agosto 19, 20, 21, 22. 3ª Agonistas y Antagonistas de Receptores Adrenérgicos Agosto 26, 27, 28, 29. 4ª Agonistas y Antagonistas de receptores Colinérgicos Setiembre 2, 3, 4, 5. 5ª Toxicología: Dosis letal 50, intoxicación por órganos fosforados, e intoxicación por drogas psicoactivas Setiembre 9, 10, 11, 12. 6ª Anticonvulsivantes, hipnóticos y sedantes Setiembre 16, 17, 18, 19. 7ª Antidepresivos y antipsicóticos Setiembre 23, 24, 25, 26. Semana de exámenes parciales Octubre 30 Set. 1, 2, 3, Oct. 8ª Anestésicos Generales, Locales y Bloqueantes Neuromusculares Octubre 7, 9 y 10. 9ª Analgésicos, Antiinflamatorios y Antipiréticos Octubre 14, 15, 16, 17. 10ª Fármacos que actúan en el tracto gastrointestinal Octubre 21, 22, 23, 24. 11ª Oxitócicos, Tocolíticos y Teratógenos Octubre 28, 29, 30, 31. 12ª Antiarrítmicos e Intoxicación Digitálica Noviembre 4, 5, 6, 7. 13ª Fármacos que actúan en el Aparato Respiratorio Noviembre 12, 13, 14, 15. 14ª Fármacos que actúan sobre el sistema de la coagulación sanguínea Noviembre 18,19,20. Entrega de Notas de Práctica, por cada profesor 3 FUENTES DE VERIFICACIÓN DE LAS PRÁCTICAS DE FARMACOLOGÍA LIBRETA DE CONTROL Cada alumno portará una libreta de control en la que consta todas las práctica a realizar, durante el segundo semestre académico, como parte del desarrollo de la asignatura de Farmacología. En cada práctica o experimento constarán los objetivos planteados y SI fueron o NO alcanzados por el alumno. Debe ser firmado por el alumno y por el profesor de práctica . HORARIOS: Las prácticas se realizan puntualmente, de lunes a viernes, en los horarios establecidos por el departamento académico de. Ciencias Básicas. Los alumnos tendrán 05 minutos de tolerancia, al cabo de los cuales se cerrarán las puertas de entrada al laboratorio. El alumno podrá ingresar a los 15 minutos de empezada la práctica o cuando se autorice el ingreso por parte de los profesores de práctica, sin embargo, considerando que la evaluación continua, exige la realización de los tres componentes, su nota automática para esa práctica de laboratorio, en los tres componentes, se catalogará como cero. Sólo se permitirá esta hipotética situación , en dos oportunidades, permitiendo el ingreso del alumno en las veces posteriores, pero se le catalogará como inasistencia. EVALUACIÓN: La evaluación de las prácticas estará dada por: las notas de los pasos previos a cada práctica (calificados de 0 a 20), por la nota de los informes de cada práctica (calificados de 0 a 20) y por la nota del profesor (calificados de 0 a 20), esta última tendrá en cuenta su participación en la realización de los experimentos y el grado de preparación de los alumnos para cada una de las prácticas. La nota final de prácticas se obtendrá de un promedio de las tres notas anteriores PASOS ESCRITOS (Componente cognitivo): Al inicio de cada práctica, se tomará un paso escrito de 5 preguntas, cada pregunta correcta tendrá un valor de 4 puntos. La calificación del paso escrito será de 0 a 20, los alumnos tendrán derecho de revisar el paso rendido, en caso de no estar de acuerdo con la nota obtenida; ello deberán hacerlo, previa inscripción, únicamente, en la semana siguiente a la práctica respectiva , en el horario de 7:00 a 7:30 am. Los pasos escritos no tienen recuperación , salvo enfermedad debidamente comprobada y durante la misma semana de la práctica. Las notas de los pasos escritos se darán a conocer por el aula virtual de farmacología de la FMH-USMP, al final de cada semana. Asimismo, se empleara como medio de comunicación, para fines de la cátedra, la plataforma de red social Facebook, en tal sentido, los alumnos solicitarán la adhesión al mismo, buscando el Facebook de la cátedra con el siguiente nombre “Farmacología Médica USMP” en el buscador del siguiente espacio www.facebook.com. INFORME DE LABORATORIO (Componente procedimental): En total, el alumno deberá presentar 14 informes de laboratorio . Todas las semanas, el alumno presentará un informe escrito (a computadora) de la práctica realizada, en este considerará las tareas de experimentos simulados consignados en la guía de práctica y los experimentos realizados in situ o simulados, de la práctica correspondiente. El informe escrito, deberá consignar lo siguiente: 1)- El o los experimentos realizados (tareas y experimentos in situ o simulados correspondientes). 2)- Los resultados obtenidos, éstos, presentados en forma relatada y en gráficos o tablas según corresponda. 3) - Discusión, sección donde se explica los fenómenos farmacológicos observados, los mecanismos involucrados en la producción de los mismos, confrontando con la revisión bibliográfica. 4)- Conclusiones. El informe será personal y será evaluado, calificado y devuelto al alumno, por su profesor de práctica. NOTA DEL PROFESOR (Componente actitudinal) : Cada una de las mesas de prácticas, estará bajo la responsabilidad de un profesor de la asignatura, durante todo el período lectivo, quien orientará y evaluará el desempeño de sus alumnos durante la ejecución de la práctica y firmará la libreta de control, consignando SI alcanzó o NO las competencias programadas. ASISTENCIA: La asistencia a prácticas es obligatoria. La inasistencia a más del 30% (2 inasistencias) de prácticas, inhabilita al alumno, de acuerdo al reglamento de evaluación. COMUNICACIÓN Y RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS: Se recomienda al alumno, la siguiente ruta: Profesor de práctica, Coordinador de Práctica y Jefe de Cátedra. Excepcionalmente , Director del Departamento de Ciencias Básicas. 4 RELACIÓN DE HERRAMIENTAS DE SIMULACIÓN QUE SE EMPLEARÁN EN LAS PRÁCTICAS DE FARMACOLOGÍA MÉDICA: 1. Software Virtual Pharmacology Lab, Dept. Of Medicine and Dept. of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. 2. Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam. 3. Software The Virtual Cat V2.6.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. 4. Software The Rat Cardiovascular System V3.3.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. 5. Software Organ Bath Simulation, V2.2, Dr John Dempster, University of Strathclyde. 6. Software Simulation of the Cardiovascular System V. Beta 4.2, Dr. Armando Pacher y Dr. Roberto Lombardo, Entre Ríos National University. 7. Journal of Visualized Experiment JOVE on line www.jove.com 8. Software, Ex Pharm-DOG, VE1.1.0, By R. Raveendran, Deparment of Pharmacology, JIMPER, Pondicherry, India. 9. Software, PaigeTM XT, V.8.504 XT Single Station, Mad Scientist Software. Estados Unidos. 10. Software, ExPharm – Heart E1.00, By R. Raveendran, Deparment of Pharmacology, JIMPER, Pondicherry, India. 5 PRIMERA PRÁCTICA: Factores que modifican los efectos de los fármacos “El hombre que hace que las cosas difíciles sean fáciles es un buen educador” - Ralph Waldo Emerson OBJETIVO GENERAL: Adquirir por parte de los alumnos, los conocimientos, habilidades y destrezas que le permitan reconocer los diferentes factores que modifican los efectos de los fármacos. OBJETIVOS ESPECÍFICOS (COMPETENCIAS): Al finalizar la práctica, el alumno: - Explica correctamente los parámetros utilizados para evaluar los efectos de los fármacos - Manipula, adecuadamente, los animales de laboratorio, cumpliendo los aspectos bioéticos - Explica correctamente cómo las diferentes vías de administración de un fármaco, modifican los efectos del mismo. - Explica correctamente cómo la administración simultánea de fármacos o los vehículos de administración de un fármaco modifican los efectos del fármaco. - Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos TAREAS PARA EL ALUMNO: El alumno debe revisar, previamente, los capítulos de Farmacocinética y Farmacodinamia, en la bibliografía consignada; asimismo, debe revisar aspectos generales (farmacocinéticos, farmacodinámicos y farmacosológicos) de los fármacos a utilizar en la realización de la presente práctica, y el procedimiento a seguir en la realización de los diferentes experimentos, consignados en su Guía de Práctica. EXPERIMENTO Nº 1: Vías de Administración Fármaco: Diazepam, sol. 10 mg en 2 ml. Especie: Ratón. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio Procedimiento: En cada mesa de trabajo se administrará a un ratón, Diazepam 10 mg/Kg de peso, por las siguientes vías: 1. Oral .- Usando una cánula metálica 2. Subcutánea .- debajo de la piel del lomo 3. Intramuscular .- en el músculo cuádriceps 4. Intraperitoneal.- Cuadrante inferior izquierdo del abdomen 5. Rectal.- mediante una cánula Tomar como parámetros de comparación: el período de latencia de la droga, la intensidad, la duración del efecto y las manifestaciones observadas en el roedor. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en un ratón, escogiendo una vía de administración. Para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Asimismo, presentar el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en él acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº 1: Vías de Administración, matriz de recolección de datos Ratón n° (marca) Dosis Vía Período de Latencia (minutos) Intensidad de efecto Duración de efecto (minutos) Observaciones mg ml Basal Cambio Intensidad de efectos: Sin efecto= 0. Sedante= +. Hipnótico= ++. Hipnosis profunda= +++. Parálisis Respiratoria= ++++. 6 EXPERIMENTO Nº 2: Interacciones Farmacológicas Fármacos: Estricnina sol., al 0.1 % / Gelatina Sol. 15 % / Adrenalina Sol. 1 o/oo / Agua destilada Especie: Ratón. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. of Medicine and Dept. of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se inyectó a un ratón por vía subcutánea (Blanco / 30 g), una dosis de estricnina (1.8 mg/Kg. de peso, sol al 0.1 % , más 0.30 ml. de agua destilada). A un segundo ratón (Cabeza / 28 g), se le inyectó la misma droga, a la misma dosis y por la misma vía, pero reemplazando el agua destilada por el vehículo gelatina en sol al 15 % . A un tercer ratón (Lomo / 35 g), se le administró la misma droga, por la misma vía y a la misma dosis, pero esta vez usando como vehículo una solución de adrenalina al 1 o/oo. Se controló en los tres casos, el periodo de latencia y la intensidad del efecto, los cuales se presentan en la tabla de resultados del experimento. Para el informe correspondiente, se presentara la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en él acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº2 Ratón n° (marca) Fármacos y dosis Período de Latencia (seg.) Intensidad de efecto mg ml Blanco Estricnina 40 ++++ Agua Destilada Cabeza Estricnina 280 ++++ Gelatina Lomo Estricnina 145 ++++ Adrenalina Intensidad de efectos: Sin efecto= 0. Hiperreflexia= +. Convulsiones= ++. Coma= +++. Parálisis respiratoria= ++++. EXPERIMENTO Nº 3: Factores que modifican la concentración plasmática del Proprano lol y la Ampicilina. Fármacos: Propranolol / Ampicilina Especie: Hombre. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: A continuación se presentan 8 casos, cuyos resultados se encuentran en la tabla de resultados del experimento. Para el informe correspondiente, se deberán construir para todos los casos, gráficos de línea con eje X/Y, delimitando los siguientes parámetros clínicos farmacocinéticos y farmacodinámicos: Periodo de latencia, Tmax (tiempo máximo), Cmax (concentración máxima), T1/2 (tiempo de vida media), Duración del efecto, CME (Concentración mínima efectiva), CME (concentración máxima efectiva), ABC (área bajo la curva), Ventana terapéutica y CMT (concentración mínima toxica). En base a las gráficas y a la delimitación de los parámetros estipulados, se deberá presentar la discusión, según indicaciones asignadas en él .acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº3 Casos Tiempo (min) Concentración plasmática (ng/ml) Efecto Caso 1: Se administró a un indiv iduo adulto por v ía oral, Propranolol en dosis de 40 mg/kg. 30 60 90 120 180 240 360 420 480 63.819 60.458 40.145 30.522 22.354 18.344 13.055 11.052 9.358 Sin efecto. Sin efecto. Sin efecto. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Sin efecto. Sin efecto. Caso 2: Se administró a un indiv iduo adulto may or por v ía oral, Propranolol en dosis de 40 mg/kg. 30 60 90 120 180 240 360 420 480 1020 1080 112.744 97.054 66.282 58.074 46.804 41.426 34.119 31.077 28.312 12.249 11.160 Sin efecto. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Sin efecto. 7 Caso 3: Se administró por vía oral, a un individuo adulto con diagnóstico de insuficiencia renal, Propranolol en dosis de 40 mg/kg 30 60 90 120 180 240 360 420 480 540 600 103.431 73.487 66.282 37.100 27.171 22.298 15.868 13.434 11.375 9.632 8.156 Sin efecto. Sin efecto. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Sin efecto. Sin efecto. Caso 4: Se administró por vía oral, a un individuo adulto con diagnóstico de cirrosis hepática, Propranolol en dosis de 40 mg/kg. 30 60 90 120 180 240 480 540 840 900 211.171 150.036 75.745 55.474 45.524 38.307 23.224 19.665 8.562 7.250 Sin efecto. Crisis de Asma. Antiarrítmico y Crisis de Asma. Antiarrítmico y Crisis de Asma. Antiarrítmico y Crisis de Asma. Antiarrítmico y Crisis de Asma. Antiarrítmico y Crisis de Asma. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Sin efecto. Caso 5: Se administró por vía oral, a un individuo adulto con diagnóstico de cirrosis hepática, Propranolol en dosis de 120 mg/kg. 30 60 90 120 180 240 480 540 840 900 1000 1100 1300 590.851 419.797 278.751 211.932 155.214 127.376 64.979 55.023 23.956 20.286 15.290 11.525 6.657 Antiarrítmico. Debilidad muscular y fatiga. Debilidad muscular y fatiga. Hipotensión. Hipotensión. Hipotensión. Debilidad muscular y fatiga. Debilidad muscular y fatiga. Crisis de Asma. Crisis de Asma. Antiarrítmico. Antiarrítmico. Sin efecto. Caso 6: Se administró a un indiv iduo adulto por v ía oral, considerando un pH gástrico de 2, Ampicilina en dosis de 500 mg/kg. 60 120 180 240 300 360 480 600 6257.648 3458.025 1906.291 1050.970 579.506 319.619 97.370 29.800 -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- ------------- -------------- Caso 7: Se administró a un indiv iduo adulto por v ía oral, considerando un pH gástrico de 3.5, Ampicilina en dosis de 500 mg/kg. 60 120 180 240 300 360 480 600 2729.737 1508.474 831.570 458.459 252.794 139.426 42.475 12.999 -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- ------------- -------------- Caso 8: Se administró a un paciente con insuficiencia renal, por v ía oral, Ampicilina en dosis de 500 mg/kg. 60 120 180 240 300 360 480 600 8724.918 7902.845 7145.824 6461.478 5842.816 5283.518 4320.732 3533.736 -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- -------------- ------------- -------------- 8 SEGUNDA PRÁCTICA: Sinergismo y antagonismo “Las grandes obras no son fruto de la fuerza sino de la perseverancia” - Samuel Jonson OBJETIVO GENERAL: Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten entender, comprender y explicar, correctamente, los fenómenos farmacológicos de Sinergismo y Antagonismo que se presentan con la administración simultánea de fármacos. OBJETIVOS ESPECÍFICOS (COMPETENCIAS): Al terminar los experimentos que forman parte de la presente práctica, el alumno: Interpreta y explica, correctamente, el sinergismo que se presenta con la administración simultánea de Cocaína y Adrenalina, a los animales de experimentación. Interpreta y explica, correctamente, el antagonismo que se produce entre Cianuro y Nitrito de sodio, en animales de laboratorio, y la importancia de éste último en la intoxicación por Cianuro. Interpreta y explica, correctamente, el antagonismo entre Estricnina y Diazepam y entre Calcio y Magnesio Trabaja en equipo y mantiene un comportamiento ético deontológico en la relación con sus compañeros y el manejo de los animales de laboratorio. Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos TAREAS PARA EL ALUMNO: Antes de realizar la presente práctica, el alumno, deberá conocer y explicar correctamente los fenómenos de Sinergismo, Antagonismo, Antidotismo, tipos y mecanismos de producción, para lo cual debe revisar, en la bibliografía consignada, todo lo concerniente a estos fenómenos farmacológicos. Igualmente, debe conocer los aspectos generales de los fármacos a utilizar en la presente práctica y los procedimientos a seguir en cada uno de los experimentos. EXPERIMENTO Nº1: Sinergismo Cocaína – Adrenalina Fármacos: Cocaína, Clorhidrato, solución al 1% / Adrenalina solución al 10/00 Especie: 1 Conejo albino grande, por mesa. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti. Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Exponer las pupilas de un conejo a un mismo grado de iluminación, para no alterar el reflejo fotomotor. Abrir los párpados de los conejos con los dedos pulgar e índice de la mano izquierda y con la mano derecha, acercar una regla graduada, evitando el contacto con las pestañas y determinar el diámetro pupilar en ambos ojos, como datos basales. Luego aplicar en el saco conjuntival derecho 2 gotas de la solución de cocaína al 1% , evitando el escape de la sustancia, durante 1 minuto, diez minutos después, medir nuevamente el diámetro de la pupila derecha, e instilar en ambos sacos conjuntivales, 2 gotas de adrenalina en sol. al 10/00, de modo que al final el ojo derecho habrá recibido ambas drogas. Cinco minutos después de la última aplicación medir ambas pupilas y analizar los resultados. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en un conejo, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Asimismo, presentara el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en él acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab. EXPERIMENTO Nº 1: Sinergismo Cocaína-Adrenalina, matriz de recolección de datos Basal Cocaína Epinefrina Observaciones Cambio Cambio Ojo derecho Diámetro de la pupila (mm) Reflejo corneal Saco conjuntival Ojo izquierdo Diámetro de la pupila (mm) Reflejo corneal Saco conjuntival Reflejo corneal: Presente= “-”. Retardado (fotomotor presente)= “+”. Retardado (fotomotor ausente)= “++”. Ausente= “+++” Saco conjuntival: Normal (rojizo y húmedo)= “-”. Rosado y/o moteado= “+”. Rosado y menor humedad= “++”. Blanquecino y seco= “+++” 9 EXPERIMENTO Nº2: Antagonismo fisiológico Fármacos: Estricnina, Sulfato, solución al 1 0/0 / Diazepam, sol. 10 mg en 2 ml. Especie: 2 ratones blancos, de 25 a 30 g de peso. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti. Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: A un ratón se le inyectará previamente Diazepam a la dosis de 10 mg/Kg de peso por vía intraperitoneal, dos minutos después se le administrará sulfato de estricnina en sol. al 1% por vía subcutánea. Se anotará el período de latencia de las convulsiones y la duración de efectos. El ratón control que solo recibe estricnina, se observará en el Software. Anotar y comparar los resultados obtenidos en ambos animales. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en un ratón, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Asimismo, también deberá consignar en el informe, las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en él acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab. EXPERIMENTO Nº 2: Antagonismo, matriz de recolección de datos Ratón n° (marca) Fármacos y dosis mg ml Período de Latencia Intensidad de efecto Observaciones Estricnina Estricnina + Diazepam Intensidad de efectos: Sin efecto= -. Hipereflexia= +. Convulsiones= +. Coma= +++. Parálisis respiratoria= ++++ EXPERIMENTO Nº3: Antagonismo Cianuro – Nitrito Drogas: Nitrito de Sodio, solución al 2% . / Cianuro de Potasio, solución al 10/00 Especie: Paloma. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en meza de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se comienza el procedimiento tomando parámetros basales a una paloma. Seguidamente se administró a la paloma de 1.5 kg y por vía intramuscular, Cianuro de Potasio en sol. al 10/00, en dosis de 4mg/Kg. Seguidamente se procedió a observar a la paloma y delimitar los signos tóxicos (aleteo, ataxia, convulsiones), en ese instante, se procedió a inyectarle rápidamente por vía endovenosa 35 mg/kg de Nitrito de Sodio en sol. al 2 % , produciéndose la recuperación. Los resultados se encuentran en la tabla de resultados. Para el informe correspondiente, se presentará la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en él .acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento nº3, antagonismo entre Cianuro de Potasio y Nitrito de Sodio Droga Dosis Apariencia General Movimiento cabeza Posición de pie Observaciones mg ml BASAL ----- ----- 0 0 0 Animal erguido, alerta y excitado. Cianuro de Potasio 2 2 2 Inicia con ataxia, presenta aleteo y apertura del pico, progresando a la perdida de la postura. Nitrito de Sodio 1 0 0 Recupera la postura, intenta escapar volando y presenta hipotonía muscular. Apariencia general: Normal= 0. Hipotonía= 1. Sedación= 2. Movimiento de cabeza: Normal= 0. Tambalea= 1. Cae= 2. Posición de pie: Normal= 0. Ataxia= 1. Perdida de la bipedestación= 2. 10 EXPERIMENTO Nº4: Antagonismo Calcio-Magnesio Fármacos: Sulfato de Magnesio, al 20 % . / Cloruro de Calcio, al 10 % . Especie: 1 Conejo albino de 4 kg. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se inició el experimento tomando los parámetros basales en el conejo. Enseguida, a un conejo de 4 Kg, se le inyectó por vía intravenosa, muy lentamente, Sulfato de Mg al 20 % , dosis de 4 mililitros, lo cual provocó manifestaciones de depresión. En estado de depresión, se administró por vía endovenosa y lentamente, Cloruro de Calcio al 10 % , dosis de 6 mililitros y se observó nuevas reacciones del animal. Los resultados pueden observarse en la tabla de resultados del experimento. Para el informe correspondiente, se presentara la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, será simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa . Tabla de resultados del experimento nº4, antagonismo entre Calcio y Magnesio Droga Dosis Apariencia General Tono Muscular Reflejo Antigravídico Frecuencia Respiratoria Frecuencia Cardiaca mg ml BASAL ----- ----- 0 0 0 0 0 Sulfato de Magnesio 4 2 2 2 1 1 Cloruro de Calcio 6 1 1 1 2 0 Apariencia general: Normal= 0. Ansiedad= 1. Depresión (estado letárgico)= 2. Tono Muscular: 0= Normal. 1= Hipotonía. 2= Parálisis Flácida. Reflejo Antigravídico: Normal= 0. Retardado= 1. Ausente (cabeza caída)= 2. Frecuencia Respiratoria: 0= Normal. 1= Disminución. 2= Aumento. Frecuencia Cardiaca: 0= Normal. 1= Disminución. 2= Aumento 11 TERCERA PRÁCTICA: Agonistas y antagonistas de receptores adrenérgicos “No todo lo grande es bueno; mas todo lo bueno es grande” - Melchor de Santa Cruz OBJETIVOS: GENERAL Adquirir, por parte del alumno, los conocimientos, habilidades y destrezas que le permita explicar correctamente los efectos que se producen al activarse o inhibirse los receptores adrenérgicos, en el animal de experimentación, extrapolándolos al humano ESPECÍFICOS (COMPETENCIAS): Trabaja en equipo, en forma armónica y manipula y entiende acerca del uso adecuado de los animales de laboratorio. Explica e interpreta los efectos de la Epinefrina, Noradrenalina, Etilefrina, Fenilefrina, Nicotina, Isoproterenol, Terazosina e Histamina, administrada parenteralmente y sus mecanismos de acción. Enuncia las posibles aplicaciones y los efectos adversos de los fármacos empleados en la práctica. Describe correctamente el procedimiento seguido en la práctica y grafica correctamente los efectos observados en la práctica. Realiza la práctica simulada, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO Para la realización de la presente práctica, el alumno deberá revisar, en sus libros de texto, los aspectos farmacológicos generales (Farmacocinética, Farmacodinamia, manifestaciones adversas, tóxicos, etc.) de los fármacos a utilizar en la realización de la práctica. Asimismo debe conocer el procedimiento a seguir en los experimentos, consignado en su guía de práctica. EXPERIMENTO N°1: Efectos de los simpaticomiméticos y simpaticolíticos, sobre la FC y la PA. Fármacos: Pentobarbital sódico sol. al 6.5% / Epinefrina sol 0.1% / Etilefrina, sol. 1% / Nicotina sol. 5 % Terazosina sol. 5 % . Especie: Cerdo de 11 kg. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se procedió a pesar un cerdo, seguidamente se anestesió el mismo, con la administración endovenosa de Pentobarbital sódico, en dosis de 30 mg/kg. Estando el animal en estado de anestesia, se procedió a canalizar la arteria carótida, en donde se conectó una sonda y un manómetro de mercurio, para la obtención del registro de la presión arterial. Asimismo se rasuraron las patas traseras y la delantera derecha, en las mismas que se colocaron electrodos, que sirvieron de enlace para una máquina de electrocardiografía, que permitió el registro de la frecuencia cardiaca. Realizado todo el procedimiento antes descrito, se realizaron dos maniobras y se midió la PA y FC, estas fueron oclusión de la carótida por 30 segundos y asfixia por 45 segundos. Seguidamente, previo basal, se administró las sustancias de experimentación y se registró la PA y FC, cuyos resultados se encuentran en la tabla de resultados del experimento. La secuencia y sustancias administradas, fueron las siguientes: 1) Epinefrina 0.005 mg/kg, vía endovenosa. 2) Nicotina 0.3 mg/kg, vía endovenosa. 3) Etilefrina 0.05 mg/ kg, vía endovenosa. 4) Terazosina 0.2mg/kg, vía endovenosa. Para el informe correspondiente, se presentará la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, será simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa . Tabla de resultados del experimento nº1, Efectos de los simpaticomiméticos y simpaticolíticos, sobre la FC y la PA. Droga Dosis Presión arterial (mmHg) Frecuencia cardiaca (latidos/minuto) mg ml Basal Cambio Basal Cambio Pentobarbital sódico ------- ------- ------- ------- Oclusión de la carótida 100 110 110 150 Asfixia 110 130 90 140 Epinefrina 100 160 160 130 Nicotina 140 150 160 180 Etilefrina 125 140 205 200 Terazosina 140 40 220 50 12 EXPERIMENTO Nº 2: Efecto a dosis escalonada de fármacos adrenérgicos y antiadrenérgicos. Fármacos: Epinefrina. / Norepinefrina / Isoproterenol / Fenilefrina / Histamina Especie: Rata de 250 g. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se procedió a anestesiar a una rata, administrándole Pentobarbital sódico, dosis de 50 mg/kg. Acto seguido se procedió a tomar la medición de los basales de la presión arterial y la frecuencia cardiaca. Se realizó la medición de la PA extracorpóreamente, en la cola del roedor, como describe el método de Riva-Rocci. La FC fue captada por medio de electrocardiografía. Seguidamente, previo basal, se administró las sustancias de experimentación y se registró la PA y FC, cuyos resultados se encuentran en la tabla de resultados del experimento. La secuencia y sustancias administradas, fueron las siguientes: 1) Epinefrina en dosis de 1, 3, 6, 12, 24, 48 y 96 nmol/kg, vía endovenosa. 2) Norepinefrina 1, 3, 6, 12, 24, 48 y 96 nmol/kg, vía endovenosa. 3) Isoproterenol 1, 3, 6, 12, 24, 48 y 96 nmol/kg, vía endovenosa. 4) Fenilefrina 1, 3, 6, 12, 24, 48 y 96 nmol/kg, vía endovenosa. 5) Histamina 1, 3, 6, 12, 24, 48 y 96 nmol/kg, vía endovenosa. Para el informe correspondiente, se presentara la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en gráficos de ejes X/Y. El resto de partes del informe, según indicaciones consignadas en él .acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. 13 Tabla de resultados del experimento nº2, Efecto a dosis escalonada de fármacos adrenérgicos y antiadrenérgicos. Droga Dosis (mg) Presión arterial (mmHg) Frecuencia cardiaca (latidos/minuto) Basal Medición 1 A un 1 minuto post administración Medición 2 A los 2 minutos post administración Basal Medición 1 A un 1 minuto post administración Medición 2 A los 2 minutos post administración Pentobarbital sódico ------- ------- ------- ------- ------- ------- Epinefrina 1nmol/kg 100 90 80 170 180 190 Epinefrina 3 nmol/kg 100 125 90 170 220 180 Epinefrina 6 nmol/kg 100 140 90 170 240 195 Epinefrina 12 nmol/kg 100 155 90 170 250 205 Epinefrina 24 nmol/kg 100 160 80 170 250 200 Epinefrina 48 nmol/kg 100 175 95 170 255 230 Epinefrina 96 nmol/kg 100 180 90 170 260 230 Norepinefrina 1nmol/kg 100 115 105 160 158 158 Norepinefrina 3 nmol/kg 100 140 125 160 160 160 Norepinefrina 6 nmol/kg 100 155 125 160 170 155 Norepinefrina 12 nmol/kg 100 180 160 160 170 180 Norepinefrina 24 nmol/kg 100 190 170 160 175 180 Norepinefrina 48 nmol/kg 100 200 175 160 190 195 Norepinefrina 96 nmol/kg 100 210 160 160 200 200 Isoproterenol 1nmol/kg 100 80 130 170 180 230 Isoproterenol 3 nmol/kg 100 80 130 170 200 260 Isoproterenol 6 nmol/kg 100 75 140 170 240 275 Isoproterenol 12 nmol/kg 100 75 135 170 200 240 Isoproterenol 24 nmol/kg 100 75 140 170 210 280 Isoproterenol 48 nmol/kg 100 70 140 170 280 285 Isoproterenol 96 nmol/kg 100 70 140 170 230 285 Fenilefrina 1nmol/kg 100 115 105 170 175 170 Fenilefrina 3 nmol/kg 100 110 100 170 170 172 Fenilefrina 6 nmol/kg 100 120 100 170 170 170 Fenilefrina 12 nmol/kg 100 130 105 170 165 170 Fenilefrina 24 nmol/kg 100 140 105 170 170 165 Fenilefrina 48 nmol/kg 100 150 100 170 165 165 Fenilefrina 96 nmol/kg 100 165 105 170 160 165 Histamina 1nmol/kg 100 75 80 155 160 160 Histamina 3 nmol/kg 100 55 75 155 170 160 Histamina 6 nmol/kg 100 40 75 155 170 168 Histamina 12 nmol/kg 100 30 75 155 180 170 Histamina 24 nmol/kg 100 30 80 155 170 165 Histamina 48 nmol/kg 100 30 90 155 190 200 Histamina 96 nmol/kg 100 25 90 155 190 210 14 CUARTA PRÁCTICA: Agonistas y antagonistas de receptores colinérgicos “El que siembra errores, recoge catástrofes” - José Selgas y Carrasco OBJETIVOS: GENERAL Adquirir, por parte del alumno, los conocimientos, habilidades y destrezas que le permita explicar correctamente, los efectos que se producen al activar o bloquear los diferentes receptores colinérgicos, en el animal de experimentación, extrapolándolos al ser humano. ESPECÍFICOS (COMPETENCIAS) El alumno, realiza trabajo grupal en forma armoniosa y respetando a sus compañeros, y entiende acerca del uso adecuado de los animales de laboratorio Explica correctamente el mecanismo de acción de la Acetilcolina, Carbacol, Neostigmina, Pilocarpina, Hexametonio, Galamina y Atropina. Enuncia, analiza y explica la farmacocinética y los efectos farmacológicos de los agonistas colinérgicos. Enuncia, analiza y explica la farmacocinética y los efectos farmacológicos de los antagonistas colinérgicos. Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO Para realizar la presente práctica, el alumno deberá revisar en su libro de texto, la farmacología correspondiente a los agonistas y antagonistas de receptores colinérgicos, así como de los fármacos a utilizar en la práctica, considerando su farmacocinética, su farmacodinamia y su respectiva clasificación. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir en el laboratorio, para realizar correctamente el experimento, revisando su guía de práctica. EXPERIMENTO N°1: Efectos sistémicos de los parasimpaticomiméticos y los parasimpaticolíticos en Rata. Fármacos: Atropina solución 1 mg/ml / Pilocarpina solución al 2% Especie: Rata. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Se procede a pesar una rata, luego se le administra, por vía intraperitoneal, Pilocarpina a la dosis de 100 mg/Kg de peso. Seguidamente, se coloca, el animal en una caja de vidrio tipo Macrolon, con contenido de viruta fina. Observar todas las manifestaciones colinérgicas, por espacio de 10 minutos. Luego de este periodo, administrar la Atropina vía intraperitoneal, en dosis de 10 mg/Kg. Observar todas las manifestaciones anticolinérgicas, por espacio de 5 minutos. Si es necesario, se puede incrementar, o dar otra dosis de Atropina, hasta que se reviertan todos los efectos colinérgicos. El animal debe quedar en observación por lo menos 30 minutos hasta que se recupere . Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en una rata, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Asimismo, también deberá consignar en el informe, las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y e l resto de partes del informe, según indicaciones consignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software MICROLAB, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº 1: Efectos sistémicos de los parasimpaticomiméticos y parasimpaticolíticos, matriz de recolección de datos. Peso de la rata Fármaco Dosis (mg) Dosis (ml) Efectos basales Periodo de Latencia Efectos post administración Pilocarpina Atropina Efectos: Frecuencia cardiaca (Normal), (Aumentó +, ++,+++), (Disminuyó +,++,+++). Frecuencia respiratoria (Normal), (Aumentó +, ++,+++), (Disminuyó +,++,+++). Mucosas (Normal), (Aumentó +, ++,+++), (Disminuyó +,++,+++). Convulsiones (+) o (-), Temblores (-), (+), (++), (+++), Fasciculaciones (-), (+), (++), (+++). Lacrimación (-), (+), (++), (+++). Excitación (-), (+), (++), (+++). Sedación (-), (+), (++), (+++). Muerte (-) o (+). 15 EXPERIMENTO N°2: Efectos sistémicos de los parasimpaticomiméticos y los parasimpaticolíticos en Conejo. Fármacos: Atropina solución 1 mg/ml / Pilocarpina solución al 2% Especie: Conejo albino de 3 Kg. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Se procedió a pesar al conejo, luego se le administró, por vía intraperitoneal, Pilocarpina a la dosis de 1 mg/Kg de peso. Seguidamente, se colocó al animal de experimentación, sobre una superficie alta con la cabeza hacia abajo, de esta forma, se pudo colectar la secreción de saliva en un vaso de plástico colocado debajo de la boca y a una altura adecuada. Asimismo, se observaron las ma nifestaciones colinérgicas, por un espacio de 5 minutos. Posteriormente, se administró lentamente, Atropina a la dosis de 0.50 mg/Kg por la vía intraperitoneal, y se observó por espacio de 10 minutos, la reversión de los efectos colinérgicos. Los resultados del experimento, se encuentra en la tabla de resultados. Para el informe correspondiente, se presentará la tabla de resultados, completando las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y el resto de partes del informe, según indicaciones consignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº2, Efectos sistémicos de los parasimpaticomiméticos y los parasimpaticolíticos en Conejo. Peso del conejo Fármaco Dosis (mg) Dosis (ml) Efectos Pilocarpina Ojo: Diámetro de la pupila Basal= 5 mm. Cambio= 3 mm. Secreciones: Al minuto empieza a salivar, se colecto 5 ml. Por otra parte, se observó que las escleras oculares incrementaron su brillo. Sistema nervioso central: Se observó excitación, el animal empezó a tener sacudidas de la cabeza. Sistema gastrointestinal: Se produjo defecación. Frecuencia respiratoria: Se observó incremento de la FR, se logró apreciar en los movimientos de las narinas del animal. Atropina Ojo: el diámetro de la pupila se incrementó hasta 7 mm. Secreciones: Dejo de salivar y la mucosa oral se observó seca. Sistema nervioso central: Sedación. Sistema gastrointestinal: Dejo de defecar. Frecuencia respiratoria: Disminución de la FR. EXPERIMENTO N°3: Efectos sobre la PA y FC de los parasimpaticomiméticos y los parasimpaticolíticos en Gato. Fármacos: Acetilcolina, Neostigmina, Carbacol, Hexametonio, Galamina, Atropina Especie: Gato de 4 kg. Software: Software, The Virtual Cat V2.6.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Se procedió a anestesiar a un gato, para ello, se administró por vía intraperitoneal, Pentobarbital sódico 50 mg/kg. Seguidamente, se introdujo una cánula endotraqueal y se conectó al animal a una máquina de ventilación artificial asistida. Seguidamente, se cánula la vena braquial izquierda, la cual fue utilizada para la administración de las drogas de estudio. Enseguida se realizó la canalización de la arteria carótida izquierda, en ésta se introdujo un transductor de presión arterial, el cual fue conectado a un computador y registro las presiones sistólica, media, diastólica y la frecuencia cardiaca. En estas condiciones, se administra en dosis escalonadas las siguientes drogas: Acetilcolina, Neostigmina, Carbacol, Hexametonio, Galamina y Atropina. Las dosis administradas y los resultados, se observan en la tabla de resultados del experimento. Para el informe, se construirán graficas de líneas con ejes X/Y, en base a esta, discutir los factores que influyen en los efectos observados. Asimismo, se debe presentar las dosis administradas de las sustancias en miligramos y el resto de partes del informe, según indicaciones consignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 16 Tabla de resultados del experimento nº3, Efectos sobre la PA y FC de los parasimpaticomiméticos los parasimpaticolíticos en Gato. Droga Dosis (mg) Presión arterial (mmHg) Frecuencia cardiaca (latidos/minuto) Sistólica Media Diastólica Basal Cambio Basal Cambio Basal Cambio Basal Cambio Pentobarbital sódico -------- -------- -------- -------- -------- -------- -------- -------- Acetilcolina 1ug/kg 132 105 92 60 75 41 110 86 Acetilcolina 5ug/kg 129 75 89 30 71 10 109 26 Acetilcolina 10ug/kg 132 71 92 24 74 4 107 24 Acetilcolina 20ug/kg 133 68 92 21 75 1 109 12 Acetilcolina 50ug/kg 132 73 91 22 73 1 109 14 Acetilcolina 100ugl/kg 132 76 91 23 74 1 110 20 Neostigmina 1 ug/kg 132 102 92 59 75 40 109 69 Neostigmina 5 ug/kg 132 99 91 55 74 36 107 67 Neostigmina 10 ug/kg 132 95 92 50 74 31 107 66 Neostigmina 20 ug/kg 133 95 92 51 74 32 108 61 Neostigmina 50 ug/kg 131 97 90 52 72 32 108 66 Neostigmina 100 ug/kg 132 92 91 46 74 26 111 64 Carbacol 1 ug/kg 132 94 92 49 75 29 110 69 Carbacol 5 ug/kg 128 73 86 25 68 5 110 37 Carbacol 10 ug/kg 133 69 92 21 75 0 111 22 Carbacol 20 ug/kg 132 69 91 21 74 0 110 19 Carbacol 50 ug/kg 132 71 92 21 75 0 107 13 Carbacol 100 ug/kg 132 70 92 21 75 0 105 15 Hexametonio 1 mg/kg 133 114 92 71 75 53 110 113 Hexametonio 5 mg/kg 132 95 92 50 75 30 110 116 Hexametonio 10 mg/kg 133 92 92 47 75 27 110 117 Hexametonio 20 mg/kg 133 89 92 43 75 23 110 117 Hexametonio 50 mg/kg 133 87 92 42 75 22 108 121 Hexametonio 100 mg/kg 133 85 93 39 75 19 108 120 Galamina 1 mg/kg 133 138 92 98 75 81 107 117 Galamina 5 mg/kg 133 143 92 104 75 88 107 124 Galamina 10 mg/kg 133 143 92 104 75 88 111 124 Galamina 20 mg/kg 132 144 92 105 72 88 108 124 Galamina 50 mg/kg 132 144 91 105 74 88 107 127 Galamina 100 mg/kg 132 143 91 104 73 88 109 128 Atropina 1 mg/kg 132 137 91 98 74 81 108 116 Atropina 5 mg/kg 132 142 92 103 74 87 107 124 Atropina 10 mg/kg 132 144 92 108 75 88 108 127 Atropina 20 mg/kg 133 144 92 105 75 88 109 124 Atropina 50 mg/kg 133 144 92 105 74 88 108 126 Atropina 100 mg/kg 131 144 92 105 75 88 105 126 17 QUINTA PRÁCTICA: Toxicología, dosis letal 50, intoxicación por órganos fosforados, e intoxicación por drogas psicoactivas “La belleza del cuerpo es un viajero que pasa y la del alma un amigo que queda” - Saavedra Fajardo OBJETIVOS GENERAL Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten reconocer y explicar correctamente las manifestaciones producidas en cuadros de intoxicación, provocados por diversos grupos de fármacos o tóxicos y su tratamiento farmacológico y no farmacológico. ESPECÍFICOS: Describe y explica correctamente, el mecanismo de acción, niveles de modulación, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los inhibidores de la Acetilcolinesterasa. Explica correctamente la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de la Atropina y el Diazepam, y su importancia en el tratamiento de la intoxicación por inhibidores de la Acetilcolinesterasa. Explica y determina correctamente, la dosis letal 50, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de la Morfina y la Anfetamina. Explica correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología del Etanol, Tetrahidrocannabinol, Cocaína, y Nicotina. Explica correctamente la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de la Piridoxina y Dextrosa, y su importancia en el tratamiento de la intoxicación por etilismo agudo y de la Naloxona en la intoxicación por opioides. Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados. TAREAS PARA EL ALUMNO: Previamente, a la realización de la presente práctica, el alumno debe revisar, en sus libros de texto, la Farmacocinética, la Farmacodinamia y la Farmacosología de los fármacos a utilizar en la realización de los experimentos. Asimismo, debe conocer el o los procedimientos a seguir durante los experimentos, consignados en su guía de práctica. EXPERIMENTO Nº1: intoxicación por órgano- fosforados. Fármacos: Metamidofos / Sulfato de Atropina, solución 1 mg/ml / Diazepam solución 10 mg/2 ml Especie: 2 ratones albinos. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: A un ratón control de 30 g, se le administró 0.2 ml de Metamidofos por la vía intraperitoneal, se observarán las manifestaciones de intoxicación en el Software. Seguidamente, en la mesa de trabajo, se administrará a un ratón, Atropina (vía ip, 2 mg/Kg), o Diazepam (via ip., 10 mg/kg); cinco minutos después, se administrará el insecticida Órgano-fosforado, a la misma dosis y se observarán las manifestaciones. A otro ratón, se le administrará ambas drogas en las dosis establecidas (Atropina y Diazepam), cinco minutos después, se le administrará el insecticida Órgano- fosforado, a la misma dosis y observarán las manifestaciones. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Asimismo, también deberá consignar en el informe, las dosis administradas de las sustancias en miligramos y en mililitros y e l resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla nº1: intoxicación por órganos fosforados, matriz de recolección de datos Ratón Fármaco Dosis Efectos mg ml Metamidofos ---- Atropina y Metamidofos Diazepam y Metamidofos Atropina, Diazepam y Metamidofos Efectos: Excitación (-/+/++/+++), Sedación (-/+/++/+++), Hipnosis (-/+/++/+++), Convulsiones (-/+/++/+++), Temblores (-/+/++/+++), Fasciculaciones (-/+/++/+++), Sudoración (-/+/++/+++), Salivación (-/+/++/+++), Frecuencia respiratoria incrementada (-/+/++/+++), Frecuencia respiratoria disminuida (-/+/++/+++), Frecuencia cardiaca aumentada (-/+/++/+++), Frecuencia cardiaca disminuida (-/+/++/+++), Muerte. 18 EXPERIMENTO Nº2: Efectos sobre la PA y la FC de la Morfina y la Naloxona en Gato. Fármacos: Morfina / Naloxona Especie: Gato de 4 kg. Software: Software, The Virtual Cat V2.6.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Se procedió a anestesiar a un gato, para ello, se administró por vía intraperitoneal, Pentobarbital sódico 50 mg/kg. Seguidamente, se introdujo una cánula endotraqueal y se conectó al animal a una máquina de ventilación artificial asistida. Seguidamente, se cánula la vena braquial izquierda, la cual fue utilizada para la administración de las drogas de estudio. Enseguida se realizó la canalización de la arteria carótida izquierda, en esta se introdujo un transductor de presión arterial, el cual fue conectado a un computador y registro las presiones sistólica, media, diastólica y la frecuencia cardiaca. En estas condiciones, se administra en dosis escalonadas las siguientes drogas: Morfina, Naloxona y la combinación de ambas, considerando dosis estática de Morfina y dosis escalonada e Naloxona. Las dosis administradas y los resultados, se observan en la tabla de resultados del experimento. Para el informe, se construirán graficas de líneas con ejes X/Y, en base a esta, discutir los factores que influyen en los efectos observados. Asimismo, se debe presentar las dosis administradas de las sustancias en miligramos y el resto de partes del informe, según indicaciones consignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº2, Efectos sobre la PA y FC de la Morfina y la Naloxona en Gato. Droga Dosis (mg) Presión arterial (mmHg) Frecuencia cardiaca (latidos/minuto) Sistólica Media Diastólica Basal Cambio Basal Cambio Basal Cambio Basal Cambio Pentobarbital sódico -------- -------- -------- -------- -------- -------- -------- -------- Morfina 1ug/kg 131 128 92 88 75 71 106 112 Morfina 5ug/kg 133 123 92 82 75 64 109 116 Morfina 10ug/kg 132 125 92 85 74 67 109 118 Morfina 20ug/kg 131 124 92 83 74 66 104 118 Morfina 50ug/kg 132 112 91 70 74 52 107 118 Morfina100ugl/kg 132 110 92 67 75 49 111 118 Naloxona 1 mg/kg 130 133 89 92 71 75 109 109 Naloxona 5 mg/kg 130 133 89 92 71 75 111 109 Naloxona 10 mg/kg 130 133 89 92 71 75 111 110 Naloxona 20 mg/kg 132 133 91 92 74 75 110 108 Naloxona 50 mg/kg 133 133 93 92 75 75 107 108 Neostigmina 100 ug/kg 131 133 90 92 72 75 111 109 Morfina100ugl/kg (Basal), luego Naloxona 5 mg/kg 106 104 62 60 44 41 120 116 Morfina100ugl/kg (Basal), luego Naloxona 10 mg/kg 108 106 65 62 47 43 120 112 Morfina100ugl/kg (Basal), luego Naloxona 20 mg/kg 120 118 79 75 61 57 121 110 Morfina100ugl/kg (Basal), luego Naloxona 50 mg/kg 107 107 64 63 45 44 121 110 Morfina100ugl/kg (Basal), luego Naloxona 100 mg/kg 111 94 69 45 51 24 120 107 19 EXPERIMENTO Nº3: Dosis letal 50 (DL50) de la Anfetamina y la Morfina. Fármacos: Morfina / Anfetamina Especie: Ratón albino. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Los ensayos de toxicidad aguda de fármacos, son pruebas preclínicas de seguridad, que buscan delimitar dosis tóxicas letales, en animales de experimentación. En este experimento, se formaron dos grupos experimentales, conformados cada uno por 10 ratones albinos. A estas, se les administró por vía oral, en dosis escalonada, las siguientes drogas: Morfina y Anfetamina. Seguidamente, se evaluó a los animales durante 24 horas, siendo la variable principal de estudio, la presencia o ausencia de letalidad, en los grupos experimentales. Considerando la frecuencia de letalidad y las dosis administradas, se determina la dosis letal 50 de la droga. Los resultados del experimento se encuentran en la tabla de resultados. Se analizara en el informe, los resultados de todos los casos, mediante la construcción de graficas de líneas con ejes X/Y, en base a estas, delimitara la dosis letal 50, mediante el uso de los valores establecidos del Probit. De la misma forma, consignara el resto de partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº3, determinación de la dosis letal 50 de Anfetamina y Morfina ANFETAMINA MORFINA RATONES DOSIS (mg/kg) MUERTOS PROBIT RATONES DOSIS (mg/kg) MUERTOS PROBIT 20 1 1 3.35 20 3 5 4.33 20 5 6 4.48 20 7 6 4.48 20 9 9 4.87 20 11 11 5.13 20 13 9 4.87 20 15 14 5.52 20 17 11 5.13 20 21 12 5.25 20 23 12 5.25 20 25 15 5.67 20 27 12 5.25 20 29 13 5.38 20 33 12 5.25 20 35 14 5.52 20 41 14 5.52 20 43 15 5.67 20 48 16 5.84 20 51 17 6.04 20 56 16 5.84 20 60 17 6.04 20 EXPERIMENTO Nº4: Intoxicación por Consumo de Cannabis. Fármacos: Tetrahidrocannabinol (Cannabis sativa) Especie: Humano. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se Observará un video clip de un paciente que consumió Tetrahidrocannabinol. Se reconocerá las siguientes manifestaciones farmacológicas por efecto de la droga: Contracción de la pupila, Dilatación de vasos conjuntivales y escleras, Midriasis, Nistagmos, Tremor, Otros. De la misma forma, consignara las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla Nº4: EXPERIMENTO Nº4, Intoxicación por consumo de Tetrahidrocannabinol, matriz de recolección de datos Efectos Presencia Observaciones Si No Relajación Contracción de la Pupila Dilatación de los vasos conjuntivales y escleras Midriasis Nistagmos Tremor Otros EXPERIMENTO Nº5: Intoxicación por Consumo de Cocaína. Fármacos: Cocaína (Erytroxylum coca) Especie: Ratón. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se administrará a un ratón, por vía intraperitoneal, 15 mg/kg de cocaína. Luego de 15 minutos, observar las siguientes manifestaciones farmacológicas por efecto de Cocaína: Hiperactividad Motora, Incoordinación Motriz, Cola de Straub, Estereotipias, Otros. De la misma forma, consignara las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla Nº5: EXPERIMENTO Nº5, Intoxicación por consumo de Cocaína, matriz de recolección de datos Efectos Presencia Observaciones Si No Hiperactividad motora Incoordinación Motriz Cola de Straub Estereotipias Otros EXPERIMENTO Nº6: Intoxicación por Consumo de Nicotina. Fármacos: Nicotina (Cigarro) Especie: Rata. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se le administrará a un ratón, por vía intraperitoneal, 8 mg/kg de nicotina. De inmediato, observar las manifestaciones farmacológicas por efecto de Nicotina, reconociendo las siguientes: Hiperactividad Motora, Hipertonía, Ataxia, Cola de Straub, Piloerección, Otros. Pasados 5 minutos, observar las manifestaciones farmacológicas por efecto de Nicotina, reconociendo las siguientes: Hiperactividad Motora, Hipertonía, Ataxia, Espasmos, Cola de Straub, Pilo erección, Otros. De la misma forma, consignara las partes del informe, según indicaciones asignadas en el .acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 21 Tabla Nº6: EXPERIMENTO Nº6, Intoxicación por Nicotina, matriz de recolección de datos Efectos Inmediato A los 5 minutos Observaciones Si No Si No Hiperactividad Motora. Hipertonía. Ataxia Espasmos Cola de Straub Piloerección. Otros. EXPERIMENTO Nº7: Intoxicación Etílica Aguda. Fármacos: Alcohol etílico, solución al 40% / Piridoxina 1ml/300 mg / Dextrosa al 33% Especie: Conejo de 6 Kg. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Se trabajó con un conejo en ayunas, a este, en intervalo de diez minutos y por 3 veces, se le administró por vía intravenosa, 2 ml de la mezcla alcohólica al 40% , al final recibió 6 ml; en estos 3 periodos, se observaron y se anotaron las manifestaciones de la intoxicación alcohólica. En estado de intoxicación, se repitió la misma secuencia, pero esta vez se administró como tratamiento, en bolo, Piridoxina (4 ml) y Dextrosa (12 ml). Se observó la reversión de los efectos de intoxicación alcohólica. Los resultados del experimento, se encuentran en la tabla de resultados. De la misma forma, consignara las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº7, Intoxicación Etílica Aguda. Efectos Basal Post administración de Etanol Post administración de Piridoxina con Dextrosa 10 min 20 min 30 min 10 min Estado de conciencia 4 2 1 1 3 Reflejo antigravídico 4 2 1 0 3 Tono muscular 4 2 1 0 3 Sensibilidad dolorosa 4 3 2 2 3 Reflejo fotomotor 4 2 0 0 3 Reflejo corneal 4 2 1 1 4 Efectos: Estado de conciencia 4=Normal. 3, 2 y 1=Disminución leve, moderada y severa. Reflejo Antigravídico 4= Normal. 3,2 y 1 =Disminución leve, moderado y severo. Tono muscular 4= Normal. 3,2 y 1 =Disminución leve, moderada y severa. Sensibilidad dolorosa 4= Normal. 3, 2 y 1=Disminución leve, moderada y severa. Reflejo fotomotor 4=Normal. 3,2 y 1= Disminución leve, moderada y severa. Reflejo corneal 4=Normal. 3,2 y 1 =Disminución leve, moderada y severa. 22 SEXTA PRÁCTICA: Anticonvulsivantes, hipnóticos y sedantes “Entre dos opciones opta siempre por la más generosa” - Krishnamurti OBJETIVOS GENERAL: Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten conocer y explicar, correctamente los efectos de los diferentes fármacos anticonvulsivantes, hipnóticos y sedantes, utilizados en los diferentes experimentos, reconociendo la farmacocinética y la farmacosología de los mismos. ESPECÍFICOS: - Reconoce los diferentes tipos de convulsiones y explica, correctamente, el mecanismo de su producción. - Explica, correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología del Pentilenotetrazol. - Explica, correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los medicamentos anticonvulsivantes, en particular, de los que se emplearan en la práctica. - Explica, correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los medicamentos hipnóticos, en particular, de los que se emplearan en la práctica. - Explica, correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los medicamentos ansiolíticos, en particular, de los que se emplearan en la práctica. - Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO: Antes de asistir a la práctica, el alumno debe revisar, en la bibliografía consignada, los mecanismos de producción de las convulsiones, las características de los diferentes tipos de convulsión, los mecanismos de producción del sueño y sus fases, los mecanismos de producción de ansiedad o estrés, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los diferentes fármacos a utilizar en la realización de los experimentos. Igualmente, debe conocer los procedimientos a seguir en la realización de los diferentes experimentos, consignados en su respectiva guía de práctica. EXPERIMENTO Nº1: Convulsiones inducidas por Pentilenotetrazol. Fármacos: Pentilenotetrazol, solución 2.5% / Difenilhidantoina, solución 0.5% / Diazepam, solución 10 mg/2 ml Carbamazepina, solución 0.1% / Gabapentina, solución 50 mg/ml. Especie: 2 ratones de 25 a 30 g de peso. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: En cada mesa, se trabajará con 3 ratones. El ratón control, recibirá Pentilenotetrazol en dosis de 80 mg/kg y por vía intraperitoneal; este ratón, no recibirá ninguna droga anticonvulsivante y se observarán las manifestaciones, mediante simulación en Software. A los otros 2 animales de experimentación, se les administrará vía intraperitoneal, los fármacos anticonvulsivantes, a las dosis consignadas; 40 minutos después se les administrará por vía intraperitoneal, la misma dosis de Pentilenotetrazol. Comparar el período de latencia, y convulsiones entre los animales tratados con anticonvulsivantes y el animal control. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. De la misma forma, consignará las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología de mostrativa. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1, Convulsiones inducidas por Pentilenotetrazol, matriz de recolección de datos. FÀRMACO Ratón Peso Dosis mg/kg Período de latencia Intensidad de las convulsiones observaciones Pentilenotetrazol Blanco 80 Fenobarbital Cabeza 30 Difenilhidantoina Lomo 30 Diazepam Cola 10 Carbamazepina Pata 10 Gabapentina Oreja 100 Efectos: Sin convulsiones= 0. Convulsiones leves=+. Convulsiones moderadas=++. Convulsiones intensas=+++ 23 EXPERIMENTO Nº2: Efecto hipnótico en ratón mediante el sueño barbitúrico. Fármacos: Fenobarbital, 100 mg/2ml Especie: Ratón albino Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Se tomarán los parámetros basales en el ratón de experimentación (estado de alerta, reflejo de enderezamiento y reflejo corneal). Seguidamente, se administrará por la vía intraperitoneal, 40 mg/kg de Fenobarbital (opcionalmente puede emplearse Pentobarbital o Tiopental), seguidamente, se colocará al animal en una caja de observación tipo Macrolom, preservando una temperatura de la superficie y del ambiente de 37 0C, a fin de evitar la hipotermia y la muerte subsiguiente. Paso siguiente, se realizará nuevamente y de forma seriada, la medición de los parámetros de experimentación (efectos farmacológicos: estado de alerta, reflejo de enderezamiento y reflejo corneal, entre otr os), el tiempo de sueño se cuantifica desde la pérdida del reflejo de enderezamiento, hasta su recuperación total o parcial. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. De la misma forma, consignará las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología Tabla Nº2: EXPERIMENTO Nº2, Efecto hipnótico en ratón mediante el sueño barbitúrico , matriz de recolección de datos. Parámetros Basal Evaluaciones post administración de Fenobarbital 1 (min) 2 (min) 3 (min) 4 (min) 5 (min) Estado de alerta Reflejo de enderezamiento Reflejo Corneal Periodo de latencia Tiempo de sueño Otro (s): Efectos: Estado de alerta Normal= “-”. Sedación “+”, “++”, “+++”. Excitación “+”, “++”, “+++”. Reflejo de enderezamiento Normal =“ -”. Disminución “+”, “++”, “+++”. Reflejo corneal Normal =“-”. Disminución “+”, “++”, “+++”. EXPERIMENTO Nº3: Efecto ansiolítico en roedor mediante la prueba de Irwin . Fármacos: Alprazolam, solución al 0.5 % / Anfetamina. Especie: Ratón albino Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Mediante simulación en Software, se administrará 40 mg/kg de Anfetamina, por vía intraperitoneal a un ratón, el cual servirá de control negativo, en este se tomaran los parámetros de experimentación (estado de alerta, piloerección, irritabilidad, sensibilidad). En otro ratón, se iniciara evaluando los parámetros de experimentación, paso siguiente, se le administrara por la vía intraperitoneal, Alprazolam en dosis de 1 mg/kg, seguidamente, se colocara al animal en una caja de observación tipo Macrolom, preservando una temperatura del ambiente en rango entre 19 a 29 0C. Paso siguiente, se realizara nuevamente y de forma seriada, la medición de los parámetros de experimentación ( estado de alerta, piloerección, irritabilidad, sensibilidad). Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. De la misma forma, consignará las partes del informe, según indicaciones asignadas en el .acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología Tabla Nº3: EXPERIMENTO Nº3, Efecto ansiolítico en roedor mediante la prueba de Irwin, matriz de recolección de datos. Parámetros Basal Evaluaciones post administración de Fenobarbital 1 (min) 2 (min) 3 (min) 4 (min) 5 (min) Estado de alerta Piloerección Irritabilidad Sensibilidad Periodo de latencia Otro (s): Efectos: Estado de alerta Normal= “-”. Sedación “+”, “++”, “+++”. Hiperactividad “+”, “++”, “+++”. Piloerección “Si” o “No”. Irritabilidad “ -”, “+”, “++”, “+++”. Sensibilidad Normal =“-”. Hipersensibilidad “+”, “++”, “+++”. 24 EXPERIMENTO Nº4: Convulsiones por Electrochoque supra máximo Fármacos: Fenobarbital, solución al 2 % / Difenilhidantoina, solución al 0.5 % / Diazepam, solución 10 mg/2 ml / Carbamazepina, solución al 0.1% Especie: Rata albino de 250 g. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Se indujo las convulsiones por estímulo eléctrico supra-máximo, en la rata control que no recibió ninguna droga. Se consideró como parámetros, las fases de flexión y extensión tónicas, de los miembros posteriores, el clonus y la depresión post-paroxismal, del animal de experimentación. Las 4 ratas restantes, recibieron los anticonvulsivantes consignados, vía intraperitoneal en las dosis indicadas. Una hora después, se provocó convulsiones por electrochoque máximo. Los resultados se muestran en la tabla de resultados. Para el informe, se debe presentar las dosis administradas de las sustancias en miligramos y mililitros, como también consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, será simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento nº4, Convulsiones por Electrochoque supra máximo FÀRMACO Rata Dosis mg/kg Dosis (mg) Dosis (ml) Intensidad de las Convulsiones Observaciones Control Blanco ---- 0 Fenobarbital Cabeza 30 ++ Difenilhidantoina Lomo 30 + Diazepam Cola 10 ++ Carbamazepina Pata 10 + Efectos: Sin convulsiones= 0. Convulsiones leves= +. Convulsiones moderadas= ++. Convulsiones intensas= +++ 25 SÉPTIMA PRÁCTICA: Fármacos antidepresivos y antipsicóticos “Las derrotas de la vida conducen a las más grandes victorias” - Max-Pol Fouchet OBJETIVOS GENERAL: Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten conocer y explicar, correctamente los efectos de los diferentes fármacos antidepresivos y antipsicóticos, utilizados en los diferentes experimentos, reconociendo la farmacocinéti ca, farmacodinamia y la farmacosología de los mismos. ESPECÍFICOS: - Reconoce los principales mecanismos neurofisiológicos implicados en la producción de la psicosis y la depresión. - Explica, correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los fármacos antipsicóticos y antidepresivos, en particular, de los que se emplearan en la práctica. - Explica y reconoce correctamente, las principales reacciones adversas de los fármacos antipsicóticos y antidepresivos. - Explica y reconoce correctamente, las principales interacciones farmacológicas de los fármacos antipsicóticos y antidepresivos. - Realiza las prácticas in vivo y/o simuladas, analizando, interpretando y explicando los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO: Antes de asistir a la práctica, el alumno debe revisar, en la bibliografía consignada, los mecanismos de producción de la depresión y la psicosis, las características neurofisiológicas implicadas en estos cuadros nosológicos, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los diferentes fármacos a utilizar en la realización de los experimentos. Igualmente, debe conocer los procedimientos a seguir en la realización de los diferentes experimentos, consignados en su respectiva guía de práctica. EXPERIMENTO Nº1: Efecto antidepresivo de los fármacos, mediante la prueba del nado forzado. Fármacos: Mirtazapina, solución al 0.2 % / Amitriptilina, solución al 0.3 % / Fluoxetina, solución al 0.5 % Especie: Ratón albino macho de 25 g. Software: Journal of Visualized Experiment JOVE on line www.jove.com Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: El experimento comienza 24 horas previas a la práctica de farmacología, con la fase de climatización, así, se inicia colocando al roedor en un cilindro de vidrio, cuyas dimensiones serán de 23 cm de altura por 25 cm de diámetro, este contendrá agua hasta una altura de 12 cm, conservando una temperatura constante de 22 0C +/- 2 0C, empleando una placa caliente graduable entre 0 a 100 0C. El roedor permanecerá por 15 minutos en el cilindro de vidrio, luego de este periodo será extraído del mismo, seguidamente debe ser secado con una toalla, para luego ser colocado en una jaula tipo Macrolom, con acceso a agua y alimento ad libitum y condiciones ambientales estándar. El día de la práctica de laboratorio (post 24 horas de la fase de climatización), el roedor recibirá la sustancia a evaluación, por la vía intraperitoneal, luego de 30 minutos, será colocado en el cilindro de vidrio, en las mismas condiciones antes descritas. A partir de la introducción del roedor al cilindro de vidrio, se empieza a tomar el tiempo, considerando 6 minutos, los primeros 2 minutos de este periodo, son de re-climatización, por tanto, durante los 4 minutos restantes, empleando un cronometro digital, se medirá el tiempo de inmovilización en que permanece el roedor (tiempo donde el ratón no exploro activa mente el cilindro o trato de escapar del mismo). La toma del tiempo de inmovilización, será realizada por 2 o 3 alumnos, independientemente. Adicionalmente, el alumno podrá realizar una videograbación del periodo de toma de inmovilización. Las sustancias a evaluar serán las siguientes: Suero fisiológico 0.1 ml/10g de P.C., Mirtazapina 10 mg/kg, Amitriptilina 20 mg/kg y Fluoxetina 30 mg/kg. El alumno anotara los tiempos de inmovilización y demás observaciones en la tabla de recolección de datos. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Para el informe, se debe presentar las dosis administradas de las sustancias en miligramos y mililitros, como también consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software Windows Media o vía on line en www.jove.com, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1, Efecto antidepresivo de los fármacos, mediante la prueba del nado forzado, matriz de recolección de datos. FÀRMACO Ratón Peso Dosis mg Dosis ml Tiempo de inmovilidad observaciones Suero fisiológico Blanco Mirtazapina Cabeza Amitriptilina Lomo Fluoxetina Cola 26 EXPERIMENTO Nº2: Efecto antipsicótico de los fármacos, mediante la prueba del nado forzado. Fármacos: Clorpromazina, solución al 0.2 % / Haloperidol, solución de 5 mg/5ml / Clozapina, solución al 0.2 % Especie: Ratón albino macho de 25 g. Software: Journal of Visualized Experiment JOVE on line www.jove.com Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: El experimento comienza 24 horas previas a la práctica de farmacología, con la fase de climatización, así, se inicia colocando al roedor, en un cilindro de vidrio cuyas dimensiones serán de 23 cm de altura por 25 cm de diámetro, este contendrá agua, hasta una altura de 12 cm, conservando una temperatura constante de 22 0C +/- 2 0C, empleando una placa caliente graduable entre 0 a 100 0C. El roedor permanecerá por 15 minutos en el cilindro de vidrio, luego de este periodo, será extraído del mismo, seguidamente debe ser secado con una toalla, para luego ser colocado en una jaula tipo Macrolom, con acceso a agua y alimento ad libitum y condiciones ambientales estándar. El día de la práctica de laboratorio (post 24 horas de la fase de climatización), el roedor recibirá la sustancia a evaluación, por la vía intraperitoneal, luego de 30 minutos, será colocado en el cilindro de vidrio, en las mismas condiciones antes descritas. A partir de la introducción del roedor al cilindro de vidrio, se empieza a tomar el tiempo, considerando 6 minutos, los primeros 2 minutos de este periodo, son de re-climatización, por tanto, durante los 4 minutos restantes, empleando un cronometro digital, se medirá el tiempo de inmovilización en que permanece el roedor (tiempo donde el ratón no exploro activamente el cilindro o trato de escapar del mismo). La toma del tiempo de inmovilización, será realizada por 2 o 3 alumnos, independientemente. Adicionalmente, el alumno podrá realizar una videograbación del periodo de toma de inmovilización. Las sustancias a evaluar serán las siguientes: Suero fisiológ ico 0.1 ml/10g de P.C., Clorpromazina 10mg/kg, Haloperidol 5 mg/kg y Clozapina 10 mg/kg. El alumno anotara los tiempos de inmovilización y demás observaciones en la tabla de recolección de datos. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento en uno o dos ratones, para el posterior informe, presentaran los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Para el informe, se debe presentar las dosis administradas de las sustancias en miligramos y mililitros, como también consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software Windows Media o vía on line en www.jove.com, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº2, Efecto antipsicótico de los fármacos, mediante la prueba del nado forzado, matriz de recolección de datos. FÀRMACO Ratón Peso Dosis mg Dosis ml Tiempo de inmovilidad observaciones Suero fisiológico Blanco Clorpromazina Cabeza Haloperidol Lomo Clozapina Cola EXPERIMENTO Nº3: Efectos neurofarmacológicos de la Clorpromazina en rata. Fármacos: Clorpromazina Especie: Rata albina de 250 g. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se administró en una rata albino macho, por la vía intraperitoneal, Clorpromazina a dosis de 20 mg/kg, de inmediato se colocó a la rata en una jaula Macrolom y se observó las manifestaciones farmacológicas en los siguientes periodos: En seguida post administración de la droga, entre los 2 o 3 minutos y entre los 6 a 10 minutos. Los resultados del experimento, se presentan en la tabla de resultados. Para el informe, se debe presentar las dosis administradas de las sustancia en miligramos, como también consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento nº3, Efectos neurofarmacológicos de la Clorpromazina en rata. Parámetros Evaluaciones post administración de Clorpromazina Basal Inmediato 2 a 3 min 6 a 10 min Actividad locomotora - + +++ / ** * Sedación - - ++ +++ Catalepsia - - - +++ Efectos: Actividad locomotora Normal= “-”. Disminución “+”, “++”, “+++”. Incremento transitorio tras estimulo doloroso “*”, “**”, “***”. Sedación “+”, “++”, “+++”. Catalepsia “+”, “++”, “+++”. 27 EXPERIMENTO Nº4: Efectos neurofarmacológicos del Haloperidol en ratón. Fármacos: Haloperidol Especie: Ratón albino de 25 g. Software: Software Microlabs, Dr. Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se administró en 3 ratones albinos machos, por la vía intraperitoneal, Clorpromazina a dosis de 2, 5 y 15 mg/kg, de inmediato se colocó al roedor en una jaula Macrolom y se observó las manifestaciones farmacológicas. Los resultados del experimento, se pr esentan en la tabla de resultados. Para el informe, se debe presentar las dosis administradas de las sustancia en miligramos, como también consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento nº4, Efectos neurofarmacológicos del Haloperidol en ratón. Parámetros Evaluaciones post administración de Haloperidol 2 mg 5 mg 15 mg Actividad locomotora ++/*** +++/** +++/* Sedación ++ ++ +++ Catalepsia ++ ++ +++ Reflejo corneal +++ +++ ++ Reflejo de enderezamiento +++ +++ +++ Efectos: Actividad locomotora Normal= “-”. Disminución “+”, “++”, “+++”. Incremento transitorio tras estimulo doloroso “*”, “**”, “***”. Sedación “+”, “++”, “+++”. Catalepsia “+”, “++”, “+++”. Reflejo corneal activo “+”, “++”, “+++”.Reflejo de enderezamiento activo “+”, “++”, “+++”. EXPERIMENTO Nº5: Efecto antidepresivo del Litio, mediante la prueba de suspensión de la cola en ratón. Fármacos: Litio. Especie: Ratón albino. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3769/the- tail-suspension- test Buscar directo en on line en www.jove.com, Como: The Tail Suspension Test Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/ video/3769/the-tail-suspension-test o buscar el artículo on line en www.jove.com como: The Tail Suspension Test. Seguidamente, discutir los resultados presentados en la figura 1, respecto al efecto del Litio. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. 28 OCTAVA PRÁCTICA: fármacos anestésicos generales, anestésicos locales y bloqueantes neuromusculares “La cortesía no cuesta nada y compra mucho” - Miguel De Montaigne OBJETIVOS GENERAL: Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le facilite conocer y explicar correctamente los efectos, mecanismos de acción, manifestaciones adversas e indicaciones de los fármacos utilizados en la práctica. ESPECÍFICOS: - Explica y analiza la farmacocinética, la farmacodinamia, la farmacosología y el mecanismo de acción de los fármacos Anestésicos Locales. - Explica y analiza la farmacocinética, la farmacodinamia, la farmacosología y el mecanismo de acción de los fármacos Anestésicos Generales. - Explica y analiza la farmacocinética, la farmacodinamia, la farmacosología y el mecanismo de acción de los fármacos Bloqueantes Neuromusculares. - Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos de los experimentos y simulaciones en Software. TAREAS PARA EL ALUMNO: Previamente, a la realización de la presente práctica, el alumno debe revisar en sus libros de texto, la Farmacocinética, la Farmacodinamia y la Farmacosología de los fármacos a utilizar en la realización de los experimentos. Asimismo, debe conocer el o los procedimientos a seguir durante los experimentos, consignados en su guía de práctica. EXPERIMENTO Nº 1: Anestesia Local Por Pincelación. Fármacos: Lidocaína gel al 2% . / Lidocaína crema al 4 % . / Lidocaína Spray 10 % / Vaselina. / Crema nívea. / Colonia Spray. Especie: 3 Hombres. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimientos: A un individuo vendarle los ojos. Seguidamente evaluar en la cara anterior de ambos antebrazos la sensibilidad, apuntando valores basales, de la siguiente forma: - Con un algodón, rozar cada antebrazo muy superficialmente y corroborar la sensibilidad táctil, al reconocimiento del estímulo . - Con una varilla con punta roma, escribir en cada antebrazo una letra y/o número, y corroborar la sensibilidad propioceptiva, al reconocimiento del estímulo. - Con un encendedor con borde metálico y en estado frio, colocar el mismo en cada antebrazo, y corroborar la sensibilidad termo-dolorosa, al reconocimiento del estímulo. - Con un encendedor con borde metálico y en estado caliente, colocar el mismo en cada antebrazo, y corroborar la sensibilidad termo-dolorosa, al reconocimiento del estímulo. Seguidamente, aplicar tópicamente a cada individuo, en cada antebrazo, las siguientes combinaciones de fármacos: - Individuo 1: Lidocaína gel al 2% y Vaselina. - Individuo 2: Lidocaína crema al 4 % y Crema nívea. - Individuo 3: Lidocaína Spray 10 % y Colonia Spray. Sacar la venda de los ojos, y esperar 20 minutos, para volver a colocar la venda en los ojos y tomar nuevos valores. Utilizar tabla Nº 3 para la recolección de información. Cada mesa de trabajo, realizará el experimento entre todos los estudiantes (mínimo 5 estudiantes), para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 29 Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1, Anestesia Local Por Pincelación, matriz de recolección de datos. Individuo Antebrazo Combinación Fármaco Tacto Propio- cepción Calor/ Dolor Frio/ Dolor Tipo de Fibra Observaciones P re P os t P re P os t P re P os t P re P os t 1 Izquierdo Derecho 2 Izquierdo Derecho 3 Izquierdo Derecho Intensidad de Efecto: Normal = 0. Leve = 1. Moderado = 2. Intenso = 3. Abolición = 4. EXPERIMENTO Nº2: Tipo de parálisis muscular producida por fármacos bloqueantes neuromusculares. Fármacos: Bromuro de Vecurónio 4 mg /1 ml. / Succinilcolina 500 mg/10 ml. Especie: 2 Codornices. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: A una codorniz se le administrará, por vía intramuscular, 0.02 mL de Bromuro de Vecurónio. A otra codorniz, se le administrará por la misma vía, 0.02 mL de Succinilcolina. Antes de administrar los fármacos, observar en los animales la posición erecta y la deambulación, así como el tono muscular. Después de la administración observar los efectos inmediatos y tardíos de ambos fármacos, especialmente el tipo de parálisis que producen. Este experimento, será simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla Nº2: EXPERIMENTO Nº2, Tipo de parálisis muscular producida por fármacos bloqueantes neuromusculares, matriz de recolección de datos. Fármaco Dosis mg Periodo de Latencia Descripción Tipo de parálisis Basal Bromuro De Vecuronio Succinilcolina 30 EXPERIMENTO Nº3: Anestesia General con Fentanilo en rata. Fármacos: Fentanilo / Midazolam / Flunixin (AINE) Especie: Rata de 250 g Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: En el siguiente experimento, se administra por la vía endovenosa a una rata, diferentes dosis del anestésico Fentanilo. En la tabla de resultados, se muestran la secuencia de dosis administradas y las manifestaciones observadas por efecto del anestésico. El alumno deberá analizar los resultados de todos los casos, construir una gráfica de líneas con ejes X/Y, delimitar las fases de la anestesia, y discutir los factores que influyen en los efectos observados, a causa de la administración del medicamento Anestésico General. Para el informe, el alumno presentará los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de Las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº3, Anestesia General con Fentanilo en rata. Dosis (ug/kg) Compartimiento Central de inmediato Ritmo Cardiaco (lat/min) Ritmo Respiratorio (resp/min) Locomoción Reflejo al Pinchamiento (dolor) Reflejo Postural Enderezamiento Reflejo Corneal Reflejo Estiramiento de la Pata mg [ng/l] [mg/l] Basal ----- ------- 350 81 +++ +++ +++ +++ +++ 1 3.5 345 79 ++ +++ +++ +++ +++ 3 10 334 75 ++ +++ +++ +++ +++ 6 20 320 70 + +++ +++ +++ +++ 9 30 307 66 + ++ ++ ++ ++ 12 40 265 62 + 0 + + + 15 50 284 58 0 0 0 0 0 18 60 273 55 0 0 0 0 0 21 70 264 53 0 0 0 0 0 24 80 255 51 0 0 0 0 0 27 90 0 0 0 0 0 0 0 Efectos: +++ = PRESENTE. ++ = DISMINUCION. + = MAYOR DISMINUCION. 0 = AUSENTE EXPERIMENTO Nº4: Anestesia General con Isoflurano en rata Fármacos: Isoflurano / N2O / O2 Especie: Rata de 250 g Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam. Metodología: Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: En el siguiente experimento, se administra por la vía inhalatoria a una rata, diferentes dosis del anestésico Isoflurano. En la tabla de resultados, se muestran la secuencia de dosis administradas y las manifestaciones observadas por efecto del anestésico. El alumno deberá analizar los resultados de todos los casos, construir una gráfica de líneas con ejes X/Y, delimitar las fases de la anestesia y discutir los factores que influyen en los efectos observados, a causa de la administración del medicamento Anestésico General. Para el informe, el alumno presentará los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 31 Tabla de resultados del experimento nº4, Anestesia General con Isoflurano en rata Dosis Compar timiento Centr al de inmediato Compar timiento Centr al a los 30 minutos Ritmo Car diaco (lat/min) Ritmo Respir ator io (r esp/min) Locomoción Reflejo Pinchamiento Reflejo Postur al Ender ezamiento Reflejo Cor neal Reflejo Estir amiento Pata (%) (mg) (%) (mg) (%) (mg) Basal ----- ------- 350 81 +++ +++ +++ +++ +++ 0.6 0.2 0.3 329 74 ++ +++ +++ +++ +++ 0.9 0.3 0.5 320 70 ++ +++ +++ +++ +++ 1.2 0.5 0.7 311 67 + ++ ++ ++ ++ 1.5 0.7 0.9 303 65 + ++ ++ ++ ++ 1.8 0.8 1 295 62 0 0 + + + 2.1 1 1.2 287 59 0 0 0 0 0 2.4 1.1 1.3 281 58 0 0 0 0 0 2.7 1.3 1.5 273 55 0 0 0 0 0 3 1.6 1.8 266 53 0 0 0 0 0 4 2 2.2 0 0 0 0 0 0 0 Efectos: +++ = PRESENTE. ++ = DISMINUCION. + = MAYOR DISMINUCION. 0 = AUSENTE EXPERIMENTO Nº 5: Anestesia local por Infiltración Fármacos: Lidocaína, clorhidrato solución al 2% / Lidocaína, clorhidrato solución al 2% , más Adrenalina al 0.1º/oo Bupivacaína, clorhidrato solución al 2% / Bupivacaína, clorhidrato solución al 2% , más Adrenalina al 0.1 º/oo Especie: Conejo de 2 kg Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se procedió a depilar la pared abdominal del conejo. Luego se delimitaron 4 cuadrantes. Seguidamente, con un estimulador eléctrico, se estimuló la superficie de cada cuadrante, generando como reacción, la retracción o contracción de la piel, determinando el umbral basal. Posteriormente, se administraron los anestésicos locales específicos en cada cuadrante, en volumen de 0.4 ml (ver tabla de resultados). Post administración de las drogas, se realizan las mediciones de la variación del umbral cada 15 minutos (ver tabla de resultados) , anotando además, la variación en la intensidad de la retracción o contracción de la piel al estímulo eléctrico. Con los datos de mV (mili voltios) presentados en la tabla de resultados, realizar el cálculo del % de elevación del umbral de anestesia local. Para el informe, el alumno presentará los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº5, Anestesia local por Infiltración Fármacos Basal Primer control 1 Primer control 2 Primer control 3 Primer control 4 % Umbral mV Efecto mV Efecto mV Efecto mV Efecto mV Efecto Lidocaína 1.00 +++ 1.00 - 2.00 + 3.00 ++ 4.00 ++++ Lidocaína + Epinefrina 1.00 +++ 1.00 - 2.00 - 3.00 + 4.00 + Bupivacaína 1.00 +++ 1.00 - 2.00 - 3.00 ++ 4.00 +++ Bupivacaína + Epinefrina 1.00 +++ 1.00 - 2.00 - 3.00 + 4.00 - Intensidad de efecto: > a +++ = Muy intenso. +++ = Intenso. ++ = Moderado. + = Leve. - = Ausencia. 32 EXPERIMENTO Nº 6: Efecto de los fármacos Bloqueantes neuromusculares en el músculo diafragma. Fármacos: Tubocurare, Pancuronio, Atracurio. Especie: Rata. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam The Virtual Twitch V2.2. Dr. John Dempster, University of Strathclyde. Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Un sistema de órganos aislados, permite la evaluación de los efectos de una sustancia en una porción específica de tejido. Esto se logra aislando el órgano de una especie animal; en esta práctica se utiliza una rata, y se obtiene de ella una porción del músculo diafragma, manteniendo la integridad del nervio frénico, que es llevado a una copa del sistema de órganos aislados, en la que existe una sustancia nutric ia específica, con aireación continua con carbógeno y oxígeno, mantenida a una temperatura constante de 37 °C. En estas condiciones, uno de los bordes del músculo diafragma es sujetado a la base de la copa que lo hospeda, y el otro extremo es sujetado a un transductor, que convierte los movimientos de contracción y relajación, en gramos por fuerza, que a su vez es conectada a un computador, que automáticamente la convierte en porcentajes. El nervio frénico es conectado a un estimulador que aplica pulsos eléctricos de 8 voltios (0.5 Hz) con duración de 0.2 mseg. En este sistema simulado en el Software, se procedió a someter al músculo diafragma a los efectos del Tubocurare, Pancuronio y Atracurio, cuya secuencia de administración y dosis se encuentra en la tabla de resultados. Con los datos de gramos de tensión (g) presentados en la tabla de resultados, realizar el cálculo del % de bloqueo neuromuscular por acción de los fármacos. Analizar los resultados de todos los casos, construir una gráfica de líneas con ejes X/Y, y en base a ésta, discutir los factores que influyen en el efecto de los fármacos bloqueantes neuromusculares sobre el músculo diafragma. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla de resultados del experimento nº6, Efecto de los fármacos Bloqueantes neuromusculares en el músculo diafragma. Fármacos Dosis mg/ml Tensión (g) % de inhibición Basal 2.3 Tubocurare 1 ug/ml 1.5 Tubocurare 5 ug/ml 0.5 Tubocurare 10 ug/ml 0.3 Tubocurare 20 ug/ml 0.0 Pancuronio 0.01 ug/ml 2.2 Pancuronio 0.1 ug/ml 1.5 Pancuronio 0.5 ug/ml 0.5 Pancuronio 1 ug/ml 0.3 Atracurio 0.1 ug/ml 2.2 Atracurio 0.5 ug/ml 1.5 Atracurio 1 ug/ml 1.2 Atracurio 5 ug/ml 0.4 33 NOVENA PRÁCTICA: Analgésicos, Antiinflamatorios y Antipiréticos “La prueba más clara de la sabiduría es una alegría continua” - Miguel De Montaigne OBJETIVOS GENERAL Permitir al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten explicar, correctamente, las acciones y efectos farmacológicos de los fármacos capaces de producir analgesia, anti-inflamación y anti-pirexia. ESPECÍFICOS Describe y entiende la fisiología y la fisiopatología del dolor, la inflamación y la fiebre. Explica correctamente los mecanismos de acción de los fármacos analgésicos, antiinflamatorios y antipiréticos. Describe la farmacodinamia, farmacocinética y farmacosología de los diferentes grupos farmacológicos. Realiza las prácticas in vivo y simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados observados. TAREAS PARA EL ALUMNO Para realizar la presente práctica, el alumno deberá revisar en su libro de texto, los mecanismos de producción de dolor, la inflamación y la fiebre; la farmacología correspondiente a los grupos farmacológicos correspondientes, considerando su farmacocinética, su farmacodinamia y su respectiva clasificación. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir en el laboratorio, para realizar correctamente el experimento, revisando su guía de práctica. EXPERIMENTO Nº 1: Efecto de los fármacos analgésicos, antiinflamatorios y antipiréticos, mediante el método de contorsiones abdominales en roedor. Fármacos: Diclofenaco sódico, sol. 0.5 mg/ml / Metamizol. Sol. 1 % / Morfina clorhidrato, sol. 1 o/oo / Tramadol, sol. 50 mg/ml Parecoxib sódico, sol. 40 mg/2ml / Solución fisiológica al 0.9% / Ác. Acético, sol. 2% Especie: 2 Ratones de 25-30 g de p/c Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Se procede a pesar y marcar un ratón. Administrar por vía intraperitoneal, a un ratón (animal control – previamente recibe 0.1 ml de solución fisiológica por cada 10 g/pc), ácido acético al 2 % , en volumen de 0,2 ml por cada 10 gramos de peso (este ratón puede ser obviado y ser simulado en el Software). Observar, el comportamiento del animal, el número de contracciones (El ácido acético produce una respuesta característica de contorsión, que se manifiesta por contracciones abdominales, retorcimiento del tronco y extensión de las patas posteriores), considerando el período de latencia y el número total de contracciones durante 20 minutos. A los 5 ratones restantes, administrar por vía IP, según el esquema propuesto, las siguientes sustancias protectoras: Ratón A, cola, Diclofenaco sódico, 10 mg por Kg de peso. Ratón B, cabeza, Metamizol sódico, 30 mg /Kg de peso. Ratón C, lomo, morfina clorhidrato, 10 mg /Kg de peso. Ratón D, pata, Tramadol clorhidrato, 20 mg /Kg de peso Ratón E, oreja, Parecoxib sódico, 20 mg/kg de peso. Esperar 20 minutos y luego administrar, a todos los animales, ácido acético, vía IP, a la dosis de 0.2 ml por cada 10 gramos de peso corporal ratón. Contar el periodo de latencia y el número de contracciones y estiramientos durante 20 minutos. Determinar el porcentaje de inhibición del dolor, según la disminución de las contorsiones abdominales. Calcular también, el porcentaje de prolongación del periodo de latencia, según el periodo de latencia del ratón control. Cada mesa realizará un ratón, con una droga específica, para el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizo su práctica. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, según necesidad, podrá ser simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa 34 Tabla Nº1: Experimento Nº 1, Efecto analgésico de fármacos analgésicos por el método de contorsiones abdominales en roedor, matriz de recolección de datos. Ratones Fármacos administrados peso Dosis Período de latencia Número de contorsiones durante 20’ Analgesia mg ml % de disminución de las contorsiones % de prolongación del periodo de latencia Blanco (control) Sol. fisiológica cabeza Metamizol lomo Morfina pata Tramadol cola Diclofenaco oreja Parecoxib EXPERIMENTO Nº 2: Efecto analgésico de fármacos analgésicos por el método de la placa caliente en roedor. Fármacos: Morfina / Fenilbutazona / NaCl Especie: Ratón. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio, mediante práctica simulada en Software. Procedimiento: La placa caliente consiste en una superficie calentada, encima de un baño de agua. La temperatura es controlada, entre 56° a 57°C. Los animales son colocados en la superficie caliente, y se toma el tiempo de latencia con un cronómetro, en que el animal reacciona lamiéndose las patas delanteras o hacer saltos. Se registra el periodo de latencia, antes y después de 20, 30 o 60 minutos luego de la administración oral o subcutánea de las drogas a probar. Si el tiempo de latencia excede 30 o 60 segundos, se retira el animal de la placa caliente . Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en él .acápite de Fuentes de Verificación de Las Prácticas de Farmacología. Tabla Nº2: Experimento Nº 2, Efecto analgésico de fármacos analgésicos por el método de la placa caliente, matriz de recolección de datos. Ratones Fármacos administrados Período de latencia Analgesia % de prolongación del periodo de latencia Grupo 1 (control) Sol. fisiológica Grupo 2 Morfina Grupo 3 Fenilbutazona 35 EXPERIMENTO Nº3: Determinación del umbral del dolor en rata diabética. Fármacos: Analgésico Especie: Ratón albino y rata albino. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3785/rapid-determination -thermal-nociceptive-threshold-diabetic Buscar directo en on line en www.jove.com, Como: Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats. Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3785/rapid-determination-thermal-nociceptive-threshold-diabetic o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Rapid Determination of the Thermal Nociceptive Threshold in Diabetic Rats. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1, 2, 3 y 4. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en él acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº4: Determinación del dolor neuropatico en rata. Fármacos: Ninguna Especie: Rata albino. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3393/chronic- constriction-sciatic-nerve-pain-hypersensitivity-testing Buscar directo en on line en www.jove.com, Como: Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3393/chronic-constriction-sciatic-nerve-pain-hypersensitivity-testing o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Chronic Constriction of the Sciatic Nerve and Pain Hypersensitivity Testing in Rats. Seguidamente, discutir los resultados presentados en la figura 3. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº5: Determinación del dolor térmico en Drosophila Larvae. Fármacos: Ninguna Especie: Drosophila Larvae. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3837/ local-global -methods-assessing- thermal-nociception-drosophila Buscar directo en on line en www.jove.com, Como: Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/ video/3837/local-global-methods-assessing-thermal-nociception-drosophila o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Local and Global Methods of Assessing Thermal Nociception in Drosophila Larvae. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1,2, 3,4,5 y 6. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. 36 DÉCIMA PRÁCTICA: Fármacos que actúan en el tracto gastrointestinal “Los deseos del joven muestran las futuras virtudes del hombre” - Marco Tulio Cicerón OBJETIVOS: GENERAL Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten señalar y explicar los aspectos farmacológicos de los fármacos que actúan a nivel del tracto gastrointestinal. ESPECÍFICOS - Explica correctamente, la fisiología y la fisiopatología del tracto gastrointestinal, con énfasis en la motilidad gastrointestinal y la secreción glandular. - Explica, correctamente, la acción de la ACh, Atropina, la Hioscina, la Pargeverina, Carbacol y la Loperamida, sobre el intestino aislado de rata, incluyendo los mecanismos de acción, la farmacocinética y la farmacosología - Explica, correctamente, la acción de la Neostigmina, Atropina, y Metoclopramida, en el sistema gastrointestinal de un roedor, incluyendo los mecanismos de acción, la farmacocinética y la farmacosología. - Realiza las prácticas simuladas e in vivo, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO: Para la realización de la presente práctica, el alumno debe revisar, previamente, en la bibliografía consignada, la fisiología intestinal y la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los fármacos que actúan a nivel gastrointestinal. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir para la realización de los experimentos, consignado en la guía de práctica. EXPERIMENTO Nº1: Evaluación de la mot i l idad gast ro in test inal in vivo en roedor. Fármacos: Agua destilada, solución 10 ml. / Neostigmina, solución 0.1 mg/ml. / Sulfato de Atropina, solución 0.25 mg/1ml. / Metoclopramida, solución 10 mg/2ml. Especie: 2 Ratones Software: Ninguno Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio Procedimiento: 24 horas previo al inicio del experimento, se priva de alimentos a los roedores y se les deja con agua ad libitum. Posteriormente se administra la sustancia problema, de la siguiente forma: Ratón 1: Agua destilada, 0.1 ml/10 g P.C. por V.O. Ratón 2: Neostigmina, 0.4 mg/kg, por vía IP. Ratón 3: Sulfato de Atropina, 1,5 mg/kg, por vía IP. Ratón 4: Metoclopramida, 10mg/kg, por vía IP. Esperar 15 minutos y p roceder a administrar por vía oral, a todos los ratones, el marcador carbón activado al 5-10% , en dosis de 0.1 ml/10 gr de peso. Esperar 15 minutos y sacrificar a los animales por dislocación cervical. Seguidamente, realizar disección tipo laparotomía y extraer el intestino delgado desde la porción pilórica, hasta la unión ileocecal. Luego, medir la distancia recorrida del carbón activado que contuvo por lo menos 1cm continuo de carbón. Anotar las distancias recorridas del carbón activado y comparar los resultados, para el análisis respectivo. Cada mesa realizar á 2 ratones, pudiendo ser uno el r atón control y otr o ratón con droga. P ara el posterior informe, presentarán los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizó su práctica. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1, Evaluación de la mot il idad gast ro in test inal in vivo en roedor, mat riz de reco lección de datos Ratón Droga Dosis (mg) y (ml) Dosis Carbón Activado (ml) Tamaño del intestino delgado (cm) Recorrido del Carbón Activado (cm) % Inhibición Motilidad Intestina % Estimulación Motilidad Intestinal 1 Agua destilada 2 Neostigmina 3 Sulfato de Atropina 4 Metoclopramida 37 EXPERIMENTO Nº2: Evaluación de la mot il idad in test inal in vit ro en Í leon de rata. Fármacos: Acetilcolina solución 1% / Atropina Sulfato. Amp.1 mg/ ml / Pargeverina clorhidrato sol. 5 mg./ ml. Hioscina, sol. 20mg/ml. / Loperamida, 2mg en 10ml. Especie: Íleon de rata. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Se sacrifica una rata por dislocación cervical. Seguidamente, realizar disección tipo laparoto mía y ex tr aer un segmento de intestino delgado, de aproximadamente 3 cm. Realizar lavado de la luz intestinal, e instalarlo en el aparato de órganos aislados. Utilizar como líquido nutricio una solución de Ringer Locke, aireación continua y temperatura de 37ºC. Registrar la actividad espontánea y agregar los fár macos y observar la reacción respecto a contracción o relajación del intestino aislado. La siguiente fue la secuencia de administración de drogas: 0.2 ml de Acetilcolina. Encontrándose el segmento de intestino contraído, se instilo 0.2 ml de Hioscina. Se cambia de segmento intestinal e instilar 0.2 ml. de Acetilcolina, encontrándose el segmento contraído, se instiló 0.6 ml de Loperamida. Se cambia el segmento intestinal, e instilar 0.2 ml. de Acetilcolina, encontrándose el segmento contraído, se instiló 0.2 ml. de Pargeverina. Cambiar el segmento intestinal, e instilar 0.2 ml. Acetilcolina, encontrándose el segmento contraído, se instiló 1 ml de Atropina. Los resultados de las variaciones en las contracciones del segmento de intestino, se catalogan en intensidad de efectos, bajo la siguiente forma: Leve = +. Moderado = ++. Intensa = +++. Muy intensa = ++++. Los resultados se encuentran en la tabla de resultados. Para el informe, el alumno presentará los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, será simulado en el Software Virtual Pharmacology Lab. Tabla de resultados del experimento nº2, Evaluación de la mot il idad in test inal in vit ro en Í leon de rata. Fármacos mg Intensidad de efecto Acetilcolina +++ Hioscina ++ Acetilcolina +++ Loperamida ++ Acetilcolina ++++ Pargeverina +++ Acetilcolina, ++++ Atropina ++ EXPERIMENTO Nº3: Efecto de Acetilcolina en dosis escalonada, en Í leon aislado de rata. Fármacos: Acetilcolina Especie: Íleon aislado de rata Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Un sistema de órganos aislados, permite la evaluación de los efectos de una sustancia en una porción específica de tejido. Esto se logra aislando el órgano de una especie animal; en esta práctica se utiliza una rata, y se obtiene de ella una porción de íleon de aproximadamente 3 cm, que es llevada a la copa del sistema de órganos aislados, en la que existe una sustancia nutricia específica, solución de Ringer Locke, con aireación continua con carbógeno y oxígeno, mantenida a una temperatura constante de 37 °C. En estas condiciones, uno de los extremos del íleon es sujetado a la base de la copa que lo hospeda, y el otro es conectado a un transductor, que convierte los movimientos de contracción y relajación del intestino aislado, en fuerza, que a su vez es conectada a un computador, que automáticamente la convierte en porcentajes. En este sistema simulado en el Software Microlabs, procedemos a someter al íleon de rata, a dosis escalonada de Acetilcolina, la secuencia y los resultados podemos observarlos en una tabla. En base a los resultados observados, analizarlos, según los mecanismos farmacológicos implicados en este efecto farmacológico. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 38 Tabla de resultados del experimento Nº3, Efecto de Acetilcolina en dosis escalonada, en Íleon asilado de rata. Fármacos Dosis (mol/l) Dosis (mg) Tensión (g) Acetilcolina 1E-9 4 Lavado - 3 Acetilcolina 3E-9 2 Lavado - 2 Acetilcolina 6E-9 9 Lavado - 0 Acetilcolina 12E-9 18 Lavado - 4 Acetilcolina 24E-9 31 Lavado - 2 Acetilcolina 48E-9 49 Lavado - 3 Acetilcolina 96E-9 70 Lavado - 1 Acetilcolina 192E-9 83 EXPERIMENTO Nº4: Evaluación de la motilidad intestinal y la inflamación de la pared intestinal . Fármacos: Ninguna Especie: Roedor. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/4086/functional -assessment-intestinal-motility-gut-wall-inflammation Buscar directo on line en www.jove.com, Como: Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation. Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/4086/functional-assessment-intestinal-motility-gut-wall-inflammation o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Functional Assessment of Intestinal Motility and Gut Wall Inflammation in Rodents: Analyses in a Standardized Model of Intestinal Manipulation. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1,2 y 3. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. 39 DECIMO-PRIMERA PRÁCTICA: Oxitócicos, tocolíticos y teratógenos “Languidece la virtud sin adversarios” - Lucio Anneo Séneca OBJETIVOS: GENERAL Permitir al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten explicar e interpretar correctamente la acción de los fármacos que modifican la motilidad uterina, incrementándola o disminuyéndola y los efectos teratogénicos de las drogas durante la gestación. ESPECÍFICOS: - Interpreta y explica, correctamente, la fisiología de la gestante y su influencia en la farmacocinética y la farmacodinamia. - Interpreta y explica, correctamente, la motilidad uterina y la acción de los fármacos que incrementan la motilidad uterina (Oxitócicos), considerando su farmacocinética, su farmacodinamia y su farmacosología. - Interpreta y explica, correctamente, la acción de los fármacos inhibidores de la motilidad uterina (Tocolíticos), incluyendo la farmacocinética, la farmacodinamia y farmacosología de los mismos. - Interpreta y analiza, correctamente, el efecto teratogénico de las drogas. - Realiza las prácticas simuladas, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO: Previamente a la realización de la práctica, el alumno debe revisar, en la bibliografía consignada, la fisiología de la gestante, con énfasis a la motilidad uterina y la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los fármacos que actúan en este nivel y en particular, de los que se utilizaran en la práctica. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir para la realización del experimento. EXPERIMENTO Nº1: Evaluación de la motilidad uterina in vitro, en cuerno uterino de rata. Fármacos: Oxitocina 10 UI/ml / Ritodrina 50 mg/5ml/ Ergonovina 200mg/ml / Nifedipina 10mg/ml / Misoprostol 200 ug/ml / Sulfato de Magnesio 10% . Especie: Cuerno uterino de rata Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración, mediante simulación en Software Procedimiento: Sacrificar una rata, extirpar el útero e instalar uno de los cuernos en el vaso del aparato de órganos aislados, de 20 ml de capacidad, conteniendo solución de Tyrode con aireación continua a temperatura constante de 37ºC; registrar las contracciones uterinas mediante una palanca inscriptora en un papel ahumado, esperar durante 15 minutos hasta que se estabilice la preparación; hacer un registro de con trol y luego instilar 0.10 ml del fármaco en estudio, en el líquido nutricio, después de observar el efecto deseado, lavar con Tyrode la preparación, dejar que se estabilice y agregar el fármaco siguiente, El momento de administración del fármaco será de acuerdo al estado de contracción del útero. Las variaciones en las contracciones del segmento uterino, se catalogan en intensidad de efectos, bajo la siguiente forma: Leve = +. Moderado = ++. Intensa = +++. Muy intensa = ++++. La secuencia de drogas empleadas y los resultados se muestran en la tabla correspondiente. Para el informe, se realizarán los cálculos correspondientes y se consignaran las partes del informe, según indicaciones asignadas en él .acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología Este experimento, será simulado en Software Virtual Pharmacology Lab, en el segmento de metodología demostrativa Tabla de resultados del experimento Nº1, Evaluación de la motilidad uterina in vitro, en cuerno uterino de rata. Fármacos Dosis (ml) Dosis (mg) Efecto Misoprostol 0.30 ++ Lavado - - Ritodrina 0.20 +++ Lavado - - Ergonovina 0.40 ++++ Lavado - - Nifedipina 0.30 ++ Lavado - - Oxitocina 0.10 ++++ Lavado - - Sulfato de Magnesio 0.50 ++ 40 EXPERIMENTO Nº2: Evaluación de los efectos teratogénicos del etanol en Zebrafish. Fármacos: Etanol QP. Especie: Danio rerio. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://www.jove.com/video/3704/assessing- teratogenic-changes-in-a-zebrafish-model-of- fetal-alcohol-exposure Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y denostación en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: 4.3 horas post fertilización, embriones de Zebrafish fueron expuestos a diferentes concentraciones de etanol químicamente puro, en rangos de 0.2 % a 2.5 % , y en pulsos de 24 horas. Este periodo de exposición a etanol, es el equivalente a la fase de implantación del embrión, y a la gastrulación. Posteriormente, los embriones son colectados, y mediante técnicas moleculares como hibridación in situ, tinción de anticuerpos, tinción de cartílago, qPCR, entre otras, se evalúan los efectos teratogénicos del Etanol. Revisar el siguiente web site: http://www.jove.com/pdf/3704/ jove-protocol-3704-assessing- teratogenic-changes-in-a-zebrafish-model-of- fetal-alcohol- exposure Seguidamente, discutir los resultados presentados en la figura 2, 3 y 4 Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº3: Determinación del transporte de moléculas a través de la placenta. Fármacos: Nanopartículas Especie: Placenta humana. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/50401/determination-transport-rate-xenobiotics- nanomaterials-across Buscar directo on line en www.jove.com, Como: Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/50401 /determination-transpor t-rate-xenobiotics-nanomaterials-across o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Determination of the Transport Rate of Xenobiotics and Nanomaterials Across the Placenta using the ex vivo Human Placental Perfusion Model. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1,2, 3, 4, 5 y 6. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº4: Exposición pre-natal del Etanol y el efecto de apoptosis cerebral. Fármacos: Etanol Especie: Ratón C57BL/6. Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/50092/experimental-methods-for- testing-effects- neurotrophic-peptide-adnf-9 Buscar directo on line en www.jove.com, Como: Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice. Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/50092/experimental-methods-for-testing-effects-neurotrophic-peptide-adnf-9 o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Experimental Methods for Testing the Effects of Neurotrophic Peptide, ADNF-9, Against Alcohol-induced Apoptosis during Pregnancy in C57BL/6 Mice. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1,2 y 3. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. 41 DECIMO-SEGUNDA PRÁCTICA: Antiarrítmicos e intoxicación digitálica “La ventaja de ser inteligente es que así resulta más fácil pasar por tonto. Lo contrario es mucho más difícil” - Kart Tucholsky OBJETIVOS GENERAL: Permitirle al alumno la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten explicar correctamente el funcionamiento cardíaco in situ, los efectos y los mecanismos de acción de los fármacos en las arritmias cardiacas, en la insuficiencia cardiaca y su toxicidad. ESPECÍFICOS - Explica, correctamente, las funciones cardíacas y describe un ECG normal, identificando sus componentes. - Explica, correctamente, la fisiopatología de las arritmias cardiacas y de la insuficiencia cardiaca. - Explica, correctamente, los efectos de los fármacos antiarrítmicos, con énfasis en los digitálicos y su efecto sobre el músculo cardíaco normal e insuficiente, y su acción sobre el electrocardiograma, identificando patrones de toxicidad. - Explica, correctamente, la farmacocinética, farmacodinamia y farmacosología de los fármacos antiarrítmicos, con énfasis en los medicamentos cardiotónicos. - Explica, correctamente, las interacciones de los fármacos antiarrítmicos, en especial de los cardiotónicos, con otras familias de medicamentos y con las alteraciones hidroelectrolíticas en sangre. - Explica, correctamente, la acción de la Lidocaína y otras drogas, en el tratamiento de las manifestaciones de toxicidad digitálica. - Realiza la práctica simulada, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO: Previo a la realización de la práctica, el alumno debe revisar, en la bibliografía consignada, la fisiología cardíaca normal; la fisiopatología de las arritmias y la insuficiencia cardiaca, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los medicamentos antiarrítmicos y cardiotónicos y la metodología a seguir en la realización de la práctica, consignada en su guía respectiva. EXPERIMENTO Nº1: Efecto de los antiarrítmicos en la función cardiovascular. Fármacos: Digoxina, Milrinona, Atenolol, Verapamilo, Nitroglicerina, Calcio Especies: Humano, Rata y Gato. Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam. Software, The Virtual Cat V2.6.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. Software, The Rat Cardiovascular System V3.3.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde. Software, Simulation of the Cardiovascular System V. Beta 4.2, Dr. Armando Pacher y Dr. Roberto Lombardo, Entre Ríos National University. Metodología: Demostración en Software. Procedimiento: Se emplearan 4 Software que simulan la funcionalidad cardiovascular en especies animales y en humanos, como también la respuesta de los fármacos antiarrítmicos, en diferentes patrones cardiovasculares, tales como: Presión arterial, frecuencia cardiaca, presión en la aurícula, presión en el ventrículo, presión venosa central, fuerza de contracción, contractibilidad del ventrículo izquierdo, contractibilidad del ventrículo derecho, rigidez o tensión del ventrículo izquierdo, relajación del ventrículo izquierdo, presión pericárdica, resistencia periférica, apertura y cierre de las válvulas aortica y mitral. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1, Efecto de los antiarrítmicos en la función cardiovascular. Drogas PA FC HF ABP LVP VBP LVC RVC LVS PP PR AV MV Digoxina Milrinona Atenolol Verapamilo Nitroglicerina Calcio PA= Presión arterial. FC= Frecuencia cardiaca. HF= Fuerza del corazón. ABP= Presión arterial atrial. LVP= Presión ventricular izquierda. VBP= Presión venosa central. LCV= Contractibilidad del ventrículo izquierdo. RVC= Contractibilidad del ventrículo derecho. LVS= Tensión o rigidez del ventrículo izquierdo. PP= Presión pericárdica. PR= Resistencia periférica. AV= Válvula aortica. MV= Válvula mitral. 42 EXPERIMENTO Nº2: Intoxicación digitálica. Fármacos: Deslanosido C, sol. 0.4 mg/2ml / Cl K, sol. 10% / Lidocaína, sol. 2% / Pentobarbital, sol. 2% . Especie: Conejo de 6 kg. Software: Software Virtual Pharmacology Lab, Ing. José Mujica, Ing. Yelinna Pulliti, Dept. Of Medicine and Dept. Of Electronic Engineering, San Martin de Porres University. Metodología: Tarea y demostración en Software. Procedimiento: Se anestesió al conejo, con Pentobarbital, por vía intraperitoneal, dosis de 30 mg/kg. Acto seguido, se realizó la canalización de arteria carótida y se conectó a una barra de mercurio, para tomar registros basales de presión arterial y se conectó a un cardiógrafo donde se registró la frecuencia cardiaca. Seguidamente, se administró vía intraperitoneal, 2 ml. de Cedilanid, se reiteró esta dosis hasta que se presenten las manifestaciones cardiovasculares, los intervalos fueron entre 15 y 20 minutos. Asimismo, se administró vía intraperitoneal, 2 ml de Cl K al 10 % . En base a la presencia de las manifestaciones cardiovasculares, se administró vía intraperitoneal, Lidocaína, dosis de 1.5 mg/kg. Los resultados del experimento se muestran en la tabla de resultados. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento Nº2, Intoxicación digitálica. Droga Presión Arterial Frecuencia Cardiaca Basal 11 130 Deslanosido C, primera administración 13 92 Deslanosido C, segunda administración 13 182 Lidocaína 11 142 Cl K 10 160 EXPERIMENTO Nº3: Efecto de la Adrenalina y la Noradrenalina en dosis escalonada en rata. Fármacos: Adrenalina y Noradrenalina Especie: Rata de 250 g Software: Software, The Rat Cardiovascular System V3.3.1, Dr John Dempster, University of Strathclyde Metodología: Tarea y demostración en Software. Procedimiento: Se anestesió una rata albina, con Pentobarbital, por vía intraperitoneal, dosis de 30 mg/kg. Acto seguido, se realizó la canalización de la vena cava superior, por donde se introdujeron sensores que permitieron medir constantes cardiacas. Adicionalmente, se realizó la desmedulación de la rata (sección de la medula espinal a nivel cervical) . Seguidamente, se administró vía intraperitoneal, dosis escalonada de Adrenalina y Noradrenalina, cuya secuencia y dosis se muestran en la tabla de resultados.. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. Tabla de resultados del experimento Nº3, Efecto de la Adrenalina y la Noradrenalina en dosis escalonada en rata. Droga Dosis (mg) FC (lat/min) HF (g) ABP (mmHg) LVP (mmHg) VBP (mmHg) Basal 353 7.2 84 85 9.1 Adrenalina 5 ug/kg 477 11.3 100 101 10.9 Adrenalina 10 ug/kg 559 12 113 111 12.3 Adrenalina 20 ug/kg 577 13.9 115 115 14.1 Adrenalina 50 ug/kg 676 17.1 127 129 15.5 Adrenalina 100 ug/kg 688 16.7 117 108 16.5 Noradrenalina 5 ug/kg 389 8.1 95 98 9.7 Noradrenalina 10 ug/kg 412 8.6 142 139 10 Noradrenalina 20 ug/kg 477 10.6 162 156 9.9 Noradrenalina 50 ug/kg 553 13.2 176 178 10.9 Noradrenalina 50 ug/kg 600 14.2 188 178 12 43 DECIMO-TERCERA PRÁCTICA: Fármacos que actúan en el aparato respiratorio “El arte de envejecer es el arte de conservar alguna esperanza” - André Maurois OBJETIVOS GENERAL: Permitir al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten explicar, correctamente, las acciones y efectos farmacológicos, de fármacos que actúan en el Sistema Respiratorio. EXPECÍFICOS: - Explica correctamente la fisiología y la fisiopatología del aparato respiratorio, con énfasis a la actividad muscular y secretora bronquial. - Explica correctamente, la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los fármacos que actúan a nivel del apara to respiratoria, con énfasis a las drogas que se emplean en la práctica de laboratorio (Histamina, Acetilcolina, Clorferamina, Mepiramina, Adrenalina, Fenoterol, Dexamentasona y Bromuro de Ipratropio). - Realiza la práctica in situ y simulada, analiza, interpreta y explica los resultados obtenidos. TAREAS PARA EL ALUMNO Para realizar la presente práctica, el alumno revisará en su libro de texto, los mecanismos de inflamación, hipersecreción y broncoespasmo de las vías aéreas del aparato respiratorio; como también las familias de fármacos a emplearse en la práctica, considerando sus aspectos de farmacocinética, farmacodinamia y farmacosología. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir en el laboratorio, para realizar correctamente el experimento, revisando su guía de práctica. Experimento Nº 1: Broncoespasmo inducido por Histamina en cobayo. Fármacos: Histamina Clorhidrato, sol. 1 % . / Clorferamina maleato, sol. 10 mg/ml / Adrenalina, sol.1mg/ml. Fenoterol, sol. 5mg/ml. / Dexamentasona, sol. 4 mg/2 ml. / Bromuro de Ipratropio, sol. 250 ug/ml. Especie: Cobayos Software: Ninguno Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio Procedimiento: Se usarán 2 cobayos por mesa de práctica. Se iniciara tomando datos basales en todos los cobayos, registrando por observación directa la frecuencia respiratoria y ruidos patológicos del aparato respiratorio (sibilantes y/o roncantes). Seguidamente, se admin istrara a un cobayo, preventivamente, las siguientes drogas: Cobayo cabeza: Clorferamina maleato, 20 mg/kg vía IP (dosis de rescate 0.3 ml por vía SC). Cobayo lomo: Dexamentasona, 5 mg/kg vía IP (dosis de rescate de Clorferamina 0.3 ml por vía SC). Cobayo patas anteriores: Fenoterol, 2.5 mg/kg vía IP (dosis de rescate de Clorferamina 0.3 ml por vía SC). Cobayo patas posteriores: Bromuro de Ipratropio, 10 ug/kg vía IP (dosis de rescate de Clorferamina 0.3 ml por vía SC). Cobayo orejas: Dosis de rescate de Adrenalina 0.3 ml vía SC. Cobayo blanco: No recibe droga. Luego de 20 minutos, introducir a los Cobayos, dentro de una campana de v idrio y proceder a nebulizar con 2 ml de Histamina al 1% . Observar los cambios respecto a frecuencia respiratoria y ruidos patológicos y anotar. Al detectar un marcado deterioro de la función respiratoria, en base al incremento de la FR, ruidos patológicos entre otros, extraerlos de la campana de vidrio y de inmediato aplicar Clorferamina maleato y/o Adrenalina en dosis de rescate, como está indicado previamente. Otra maniobra de rescate que puede realizar en los cobayos, es la maniobra de nebulización con Fenoterol en dosis de 2.5 mg/kg. Cada mesa utilizará 2 cobayos, pudiendo ser uno el cobayo control y otro cobayo con droga. Para el posterior informe, presentaran los resultados de las 8 ò 12 mesas de trabajo, del día que realizo su práctica. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. 44 Experimento Nº 1: Broncoespasmo inducido por Histamina en cobayo, Matriz de recolección de datos. Dosis Basales Cambio Cobayo nº mg ml FR Ruidos Respiratorios Patológicos FR Ruidos Respiratorios Patológicos Observaciones SI NO SI NO 1 2 3 4 5 6 EXPERIMENTO Nº2: Sinergismo Histamina – Acetilcolina Fármacos: Acetilcolina, Histamina Especie: Íleon aislado de rata Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software Procedimiento: Un sistema de órganos aislados, permite la evaluación de los efectos de una sustancia en una porción específica de tejido. Esto se logra aislando el órgano de una especie animal; en esta práctica se utiliza una rata, y se obtiene de ella una porción de íleon de aproximadamente 3 cm, que es llevada a la copa del sistema de órganos aislados, en la que existe una sustancia nutricia específica, solución de Ringer Locke, con aireación continua con carbógeno y oxígeno, mantenida a una temperatura constante de 37 °C. En estas condiciones, uno de los extremos del íleon es sujetado a la base de la copa que lo hospeda y el otro extremo es sujetado a un transductor, que convierte los movimientos de contracción y relajación del intestino aislado, en gramas de fuerza, este sistema es conectado a un computador que automáticamente la convierte en porcentajes. En este sistema simulado en el Software Microlabs, procedemos a someter al íleon de rata a los fármacos a emplear, la secuencia y los resultados podemos observarlos en el gráfico 1. En base a los resultados observados, analizarlos e indicar el tipo de sinergismo que sucedió entre Histamina y Acetilcolina, como también, los mecanismos implicados en este efecto farmacológico. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. EXPERIMENTO Nº 2: Gráfico n°1, Sinergismo Histamina-Acetilcolina, resultados. 45 EXPERIMENTO Nº3: Antagonismo Histamina – Mepiramina Fármacos: Histamina / Mepiramina Especie: Íleon aislado de rata Software: Software Microlabs, Dr Henk van Wilgenburg, Dept. of Pharmacology, University of Amsterdam Metodología: Tarea y trabajo en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Un sistema de órganos aislados, permite la evaluación de los efectos de una sustancia en una porción específica de tejido. Esto se logra aislando el órgano de una especie animal; en esta práctica se utiliza una rata, y se obtiene de ella una porción de íleon de aproximadamente 3 cm, que es llevada a la copa del sistema de órganos aislados, en la que existe una sustancia nutricia específica, solución de Ringer Locke, con aireación continua con carbógeno y oxígeno, mantenida a una temperatura constante de 37 °C. En estas condiciones, uno de los extremos del íleon es sujetado a la base de la copa que lo hospeda, y el otro extremo es fijado a un transductor, que convierte los movimientos de contracción y relajación del intestino aislado, en fuerza, que a su vez es conectada a un computador, que automáticamente la convierte en porcentajes. En este sistema simulado en el Software Microlabs, procedemos a someter al íleon de rata, a los fármacos a emplear, la secuencia y los resultados podemos observarlos en el gráfico 2. En base a los resultados observados, analizarlos, e indicar el tipo de antagonismo que sucedió entre Histamina y Mepiramina, como también, los mecanismos implicados en este efecto farmacológico. Para el informe, el alumno presentara los cálculos de dosis correspondientes a los resultados presentados, como también, consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología EXPERIMENTO Nº 3: Antagonismo Histamina - Mepiramina, gráfico 2. 46 DECIMO-CUARTA PRÁCTICA: Fármacos que actúan sobre el sistema de la coagulación sanguínea “Lo peor de la ignorancia es que a medida que se prolonga adquiere confianza” - Anónimo OBJETIVOS GENERAL: Permitir, al alumno, la adquisición de conocimientos, habilidades y destrezas que le posibiliten explicar satisfactoriamente el fenómeno de la coagulación sanguínea y la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de los diferentes fármacos que la modifican. ESPECÍFICOS: - Explica, correctamente, las diferentes etapas de la coagulación sanguínea y los factores que en ella intervienen, in vivo e in vitro - Explica, correctamente, la acción de la Heparina, mecanismos de acción, indicaciones, contraindicaciones y manifestaciones adversas - Explica, correctamente, la acción del Citrato de sodio, Oxalato de sodio y Cloruro de calcio; mecanismo de acción, indicaciones y manifestaciones adversas. TAREAS PARA EL ALUMNO: Previo, a la realización de la práctica, el alumno debe revisar, en sus libros de texto de Fisiología y Farmacología, el fenómeno de la coagulación sanguínea y la farmacocinética, la farmacodinamia y la farmacosología de la Heparina, las Cumarinas, el Citrato de sodio, el Oxalato de sodio y el Cloruro de calcio. Asimismo, debe conocer el procedimiento a seguir en los experimentos, consignados en la guía de práctica. EXPERIMENTO Nº1: Evaluación de fármacos anticoagulantes in vitro. Fármacos: Heparina / Warfarina, sol. 1% / Citrato de Sodio, sol. 2% / Oxalato de Sodio, sol. 2% / Cloruro de Calcio, sol. 10% Especie: Hombre, Sangre Metodología: Trabajo en mesa de laboratorio. Procedimiento: Colocar 5 tubos de prueba, en una gradilla; conteniendo, respectivamente, las siguientes soluciones. Usar guantes por medida de seguridad: Tubo Nº1: 0.05 ml de Heparina Tubo Nº2: 0.10 ml de Warfarina 5mg. Tubo Nº3: 0.10 ml de Citrato de sodio al 2% Tubo Nº4: Citrato de Sodio al 2% + 5 gotas de cloruro de calcio al 10% Tubo Nº5: 0.10 ml de Oxalato de Sodio en sol al 2% Tubo Nº6: control, sin solución anticoagulante. Extraer sangre de la vena de un alumno voluntario, usando jeringa estéril. Colocar un ml de sangre en cada tubo. Observar el fenómeno de coagulación, hasta que se forme el coágulo completo. Anotar los tiempos en que se produce la coagulación. Tabla Nº1: EXPERIMENTO Nº1: Evaluación de fármacos anticoagulantes in vitro, matriz de recolección de datos. Tubo Nro. Fármaco Coagulación Tiempo 1 Heparina 2 Warfarina 3 Citrato de Sodio 4 Citrato de Sodio + Cloruro de Calcio 5 Oxalato de Sodio 6 Control sin Anticoagulante 47 EXPERIMENTO Nº2: Medición del Factor V en pacientes con coagulación intravascular disemin ada. Fármacos: Ninguno Especie: Humano Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3822/measurement- factor-v-activity-human-plasma- using-microplate Buscar directo on line en www.jove.com, Como: Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay. Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3822/measurement- factor-v-activity-human-plasma-using-microplate o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1 y 2 y la tabla 1. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes De Verificación De Las Prácticas De Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa. EXPERIMENTO Nº3: Efecto anticoagulante de la Enoxaparina. Fármacos: Enoxaparina Especie: Humano Software: The Journal of Visualized Experiments (JoVE). http://hinari-gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3852/rapid-point-care-assay-enoxaparin-anticoagulant- efficacy-whole Buscar directo on line en www.jove.com, Como: Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood. Windows Media Player and Microsoft office Metodología: Tarea y demostración en mesa de laboratorio, mediante simulación en Software. Procedimiento: Revisar el procedimiento del experimento en el siguiente web site: http://hinari- gw.who.int/whalecomwww.jove.com/whalecom0/video/3852/rapid-point-care-assay-enoxaparin-anticoagulant-efficacy-whole o buscar el artículo on line en www.jove.com como: Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood. Seguidamente, discutir los resultados presentados en las figura 1 y 2. Para el informe, se debe consignar las partes del informe, según indicaciones asignadas en el acápite de Fuentes de Verificación de las Prácticas de Farmacología. Este experimento, podrá ser simulado en el Software, en el segmento de metodología demostrativa.