1 UNIVERSIDAD EVANGELICA BOLIVIANA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE BIOQUIMICA Y FARMACIA TESIS PRESENCIA DEL ACIDO DELTA AMINOLEVULINICO EN MUESTRAS DE ORINA COMO BIOMARCADOR DE PLOMO PREVIA OPCION AL TITULO DE LICENCIATURA EN BIOQUIMICA Y FARMACIA UNIV.: MARIA ESTHER ALBA CAMACHO SANTA CRUZ—BOLIVIA 2014 2 ___________________________________ Tribunal Calificador Externo Colegio de Bioquímica y Farmacia Santa Cruz de la Sierra _____________________________ ______________________________ Tribunal Calificador Externo Tribunal Calificador Externo U.A.G.R.M. U.A.G.R.M. _____________________________ _______________________________ Tribunal Calificador Interno Tribunal Calificador Interno U.E.B. U.E.B. _______________________________ Jefe de Carrera Bioquímica y Farmacia U.E.B. 3 AGRADECIMIENTO A mi casa de estudio, la UNIVERSIDAD EVANGELICA BOLIVIANA, por permi- tirme ser parte de su historia. A la Facultad de Ciencias: porque en ella aprendí lo que es el quehacer cientí- fico. A mis queridos docentes que con su entrega y enseñanza fueron mis guías ideológicos de mi deber como Bioquimica-Farmaceutica ante la sociedad. Al Dr. Edwin Flores Rúa por su inapreciable enseñanza, y su ayuda en el desarrollo de mi formación profesional Al Dr. Elías Aguilera por ser mi tutor de tesis, y por colaborarme en la finaliza- ción de la misma. A mis amigos y compañeros de estudio, Ema Guzmán, Brenda Sarabia, Yesica Paz, Joselin Antezana, Diego Suarez, Yoselin Loza y Maribel Pedraza. 4 DEDICATORIA A Dios padre por haberme ayudado en el transcurso de mi vida, haciéndome cada día una mejor persona. A mis padres Wilber Alba y Mirian Camacho por su grande amor, apoyo mu- tuo, su digno ejemplo de honestidad, responsabilidad y valor para conducirme en la vida A mis hermanos Ana, Graciela, David y Brenda Alba por su apoyo incondicio- nal y sus consejos en el transcurso de mi carrera profesional. A mis docentes que nos enseñan lo importante que es el ayudar y colaborar a la sociedad A mis amigos y compañeros que siempre me animaron y me apoyaron en los momentos difíciles de mi vida. 5 INDICE 1. INTRODUCCION…………………………………………………………………………………1 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA…………………………………………………………2 2.1. Delimitación del Problema………………………………...................................................4 2.2. Límite Temporal……………………………………………………………..……………….....4 2.3. Limite Espacial…………………………………………………………….…………………....4 2.4. Limite Sustantivo………………………………………………………………………………..4 3. JUSTIFICACION……………………………………………………...……………………………5 3.1. Justificación Científica…………………………………………………..…..........................5 3.2. Justificación Social………………………………………………………....……………...…..5 3.3. Justificación Personal…………………………………………………..…..……………...….5 4. OBJETIVOS……………………………….………………………………………………………...6 4.1. Objetivo General………………………………………………………...……………………....6 4.2. Objetivos Específicos……………………………………………………..…………………....6 5. MARCO TEORICO……………………………………………………………………………….....7 5.1. PLOMO ORGÁNICO…………………………………………………………............................7 5.2. LA GASOLINA Y EL PLOMO……………………………………………………………………7 5.2.1. Clasificación…………………………………………………………………………………....8 5.2.1.1. Gasolinas Naturales…………………………………………………………………………8 5.2.1.2. Gasolinas de Destilación Directa………………………………………………………....8 5.2.1.3. Gasolinas de Cracking o Refinado...………………………………………………….….8 5.3. TETRAETILO DE PLOMO…………………………………………..……………………………9 5.3.1. Valores Límites de Exposición……………………………………………………………….9 5.3.2. Maneras de Reducir la Exposición……………………………………………………….….9 5.4. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA…………………………..……………..................................10 5.4.1.Trabajador Expuesto……………………………………………………………………….....10 5.4.1.1. Usos y fuentes de exposición al plomo…………………………………………………10 6 5.4.1.2. Fuentes de Riesgo……………………………………………………………….10 5.5. MECANISMO DE ACCIÓN…………………………………………………………..11 5.5.1. Toxicocinetica del Plomo………………………………………………….........11 5.5.1.1. Vías de Penetración……………………………………………..……….........11 5.5.1.2. Vía respiratoria…………………………………………………………………..11 5.5.1.3. Vía oral…………………………………………………………………………….11 5.5.1.4. Vía cutánea……………………………………………………………………….11 5.6. ALMACENAMIENTO EN EL ORGANISMO………………………………………12 5.6.1. Absorción…………………………………………………………………………..12 5.6.2. Distribución………………………………………………………………………...12 5.6.3. Excreción…………………………………………………………………………...12 5.7. EFECTOS SOBRE LA SALUD……………………………………………………..12 5.7.1. Efectos sobre el Tejido Hematopoyético……………………………………..13 5.7.2. Inhibición de la síntesis del Hem en los Eritroblastos…………………..…13 5.7.3. Efectos sobre los glóbulos rojos circulantes………………………………..13 5.7.4. Efectos sobre el Sistema Nervioso…………………………………………….13 5.7.5. Efectos a nivel Renal……………………………………………………………...13 5.7.6. Efectos sobre la Reproducción…………………………………………………14 5.7.7. Efectos sobre el Sistema Cardiovascular…………………………………..…14 5.8. MANIFESTACIONES CLINICAS…………………………………………………....15 5.8.1. Intoxicación aguda………………………………………………………………...15 5.8.2. Intoxicación crónica……………………………………………………………....15 5.9. FORMACION DEL ACIDO DELTA-AMINOLEVULINICO………………………..15 5.10. FORMACION DEL PORFOBILINOGENO………………………………………..16 5.10.1. Porfirias y Porfirinopatias………………………………………………………16 5.10.1.2. Porfirinopatias……………………………………………………………….....16 5.11. INDICADORES DE EFECTO…………………………………………………..…...17 5.11.1. Deshidratasa Eritrocitaria del Ácido Delta Aminolevulinico (ALA-D)…...17 5.11.2. Acido Delta Aminolevulinico Urinario (ALA-U)……………………….……...17 5.11.2.1. Tipos de enzima ALA………………………………………………………......18 5.12 DETERMINACION DE PLOMO ……………………………………………………..19 7 5.12.1. Determinación de Porfobilinogeno en Orina……………………………...19 5.12.2 Determinación de Acido Delta amino-levulinico (DELTA-ALA) en orina 5.13. FACTORES QUE PUEDEN MODIFICAR LOS RESULTADOS………………20 5.13.1. Resultados anormales………………………………………………………....20 5.13.1.1. Niveles Aumentados…………………………………………………...........20 5.13.1.2. Acido delta aminolevulinico en la orina (ALA-U)…………………........20 5.14. SÍNTOMAS…………………………………………………………………….…....20 6. HIPOTESIS………………………………………………………………………………21 7. VARIABLES……………………………………………………………………………..21 7.1. Variables dependientes…………………………………………………………..…21 7.2. Variables independientes…………………………………………………………..21 8. DISEÑO METODOLOGICO DE LA INVESTIGACION……………………………...22 8.1. TIPO DE INVESTIGACION…………………………………………………………...22 8.2. UNIVERSO Y MUESTRA……………………………………………………………..22 8.2.1. UNIVERSO……………………………………………………………………………22 8.3. INSTRUMENTOS………………………………………………………………………22 9. RESULTADOS……………………………………………………………………………26 10. DISCUSIÓN…………………………………………………………………………......26 11. CONCLUSIÓN…………………………………………………………………………..26 12. RECOMENDACIÓN…………………………………………………………………….27 13. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………………27 14. ANEXOI…………………………………………………………………………………..29 15. ANEXO II…………………………………………………………………………………32 8 RESUMEN Si cierras la puerta de los errores, dejaras fuera la verdad R. TAGORE (1861-1941) La diversidad de usos y aplicaciones del plomo y sus compuestos, han originado nuevos problemas de sanidad y a pesar de las innovaciones en cuanto a condicio- nes higiénicas, estas se encuentran todavía muy lejos de considerarse aceptables. El plomo continua siendo unos de los problemas más importantes de la salud ocu- pacional, en nuestro medio al ir a una Estación de Servicio y cargar el combustible observamos al personal, sin ninguna barrera de protección y con mayor susceptibili- dad a un riesgo de intoxicación. Es propósito de este trabajo el tratar de establecer la presencia de plomo a través de la enzima Acido-Delta-Amino-deshidrastasa (ALA-D) como biomarcador. Utili- zando la técnica de Hoesch y así utilizar estos datos para el posterior mejoramiento en las medidas higiénicas y seguridad para con los trabajadores. Conocer la importancia que tiene este tipo de padecimiento en la actualidad, cuando el auge del progreso tiene como precio el bienestar físico y moral de las personas. La industrialización no solo expone a sus trabajadores sino también a toda una so- ciedad, conduciéndola a la contaminación o a la intoxicación. En este trabajo presentamos algunos de los métodos más conocidos para la deter- minación del metal en orina, es de interés que este trabajo sea del mejor provecho por parte de los lectores. 1 1. INTRODUCCION El ácido delta amino levulinico es un precursor en la biosíntesis de la hemoglobina y se encuentra excretado normalmente en la orina en pequeñas concentraciones. El ácido delta urinario (ALA- U) se encuentra elevado en algunas enfermedades y en casos debido a la intoxicación por plomo y la protoporfirina. El plomo parece afectar la síntesis de porfirias inhibiendo la formación de porfobili- nogeno, resultando la acumulación de su precursor Acido Delta Amino-levulinico Urinario (ALA- U). La presencia de plomo como contaminante es un problema de salud pública muy difundido y no distingue entre grupos sociales, económico, ni tampoco el área. El plomo ha sido ampliamente usado por largo tiempo, por lo que la historia de este metal es muy extensa. Las ocupaciones que algún día fueron consideradas relativamente seguras, po- drían ser riesgosas porque el medio ambiente les impone, debido al uso indiscrimi- nado de substancias que contienen plomo. Como la gasolina con plomo que ha si- do utilizada y que su exposición se le atribuye el riesgo ocupacional para aquellas personas que están sometidas a la presencia desfavorable del plomo. En las dos últimas décadas el foco de interés acerca de la toxicidad del plomo en los seres hu- manos ha variado desde la exposición industrial a la exposición ambiental, a pesar de la tendencia observada en cuanto a una disminución del uso de gasolina con plo- mo. El daño bioquímico por plomo en la biosíntesis del HEM es el campo más explorado en los estudios de intoxicación plúmbica. El plomo produce un envenenamiento en los sistemas orgánicos e influye en el desarrollo del sistema cardiovascular, y quizás lo más importante en el sistema nervioso, generando un amplio rango de efectos tóxicos que incluyen anemia, fallas renales, hipertensión, desarrollo cognitivo retar- dado, deficiencia en la atención, etc. 2 2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA La distribución del plomo en el ambiente existe y ha existido siempre, de tal modo que el hombre ha estado continuamente sometido a una serie de exposición en aire, agua y alimentos. La OMS ha incluido el plomo dentro de una lista de diez produc- tos químicos causantes de graves problemas de salud pública, por manifestar pro- blemas en el riñón, bazo e hígado en aquellas personas que están en exposición a la presencia de este toxico. Dentro de la sociedad moderna, estos contaminantes naturales se han considerado como normales (pero no por ello deseables), siendo la exposición ocupacional la fuente de contaminación más común y la más importante. Teóricamente, los individuos pueden ser adaptados a trabajos específicos de acuer- do a su capacidad mental y sus aptitudes físicas, esto es posible cuando se encuen- tra a un empleado feliz y saludable; y no se cumplirá cuando el empleado carezca de capacidad física o mental, por presentar alguna enfermedad o peor aún, padeci- mientos pre-existentes como resultado de su trabajo. Las enfermedades ocupacionales pueden afectar cualquier sistema del cuerpo, y que son causadas por una exposición prolongada del empleado a su trabajo. La vía de entrada principal de absorción de plomo es la vía respiratoria, debido a la inhala- ción de los humos del metal, la excreción se realiza principalmente por riñón e intes- tino y en menos proporción por la bilis, saliva y sudor. La exposición al plomo, vendría hacer una intoxicación silenciosa que causa daños, los niveles de exposición alta, son un problema de salud pública poniendo en ma- nifiesto efectos clínicos como: trastornos en el organismo, alteración en la hemoglo- bina, trastornos neurológicos, abatimiento general, pérdida de peso, irritabilidad, do- lores de cabeza, etc. Con ello se deja ver que el riesgo ocupacional para el plomo y sus compuestos han originado nuevos problemas de sanidad en aquellos trabaja- dores que están en una exposición más alta y con la probabilidad de desarrollar al- guna enfermedad por este toxico. 3 La acido delta-aminolevulinico deshidratasa, cataliza la conversión del ácido delta- aminolevulinico hacia porfobilinogeno, que es un precursor monopirrolico en la sín- tesis del HEM. El plomo es un potente inhibidor no competitivo en la actividad de la ALA-D, afectando la actividad de la enzima tanto en su concentración como en la velocidad de su reacción, indicando con esto que el plomo interfiere con la enzima y puede considerarse la causa principal de la excreción aumentada del ALA en orina, y que su concentración en orina es el mejor indicador de intoxicación por plomo. PREGUNTA PROBLEMA Existirá la presencia de la enzima Acido-delta-Amino deshidrastasa (ALA-D) en la orina de los trabajadores de las Estaciones de Servicio de Gasolina? 4 2.1. DELIMITACION DEL PROBLEMA Límite Temporal Se realizó durante un periodo de 5 meses de Agosto hasta Diciembre del 2014. Limite Espacial Se realizó en trabajadores de las Estaciones de Servicio de Gasolina de la doble vía la guardia en la ciudad de Santa Cruz de la Sierra. Limite sustantivo Pretende realizar la identificación del Acido Delta Aminolevulinico-D en orina, me- diante la técnica de Hoesch, en los trabajadores de la Estación de servicio de Ga- solina. 5 3. JUSTIFICACION Justificación Científica Las alteraciones bioquímicas en trabajadores expuestos a compuestos orgánicos de plomo, constituyen indicadores de alteraciones precoces de la salud, aplicables pa- ra la evaluación y adopción de medidas preventivas de higiene del trabajo. La activi- dad de la enzima ácido delta-aminolevulinico deshidratasa pone en manifiesto la intoxicación plúmbica en los trabajadores laboralmente expuestos al plomo. Justificación Social La exposición a concentraciones de plomo, es un factor de riesgo común en las per- sonas que están expuestas, como los trabajadores que laboran en expendios de gasolina de la ciudad al manipular o al inhalar provocando una irritación en el tracto respiratorio. En la actualidad existen grupos de personas localizadas que por moti- vos de trabajo que desempeñan están expuestos al plomo; trabajadores acumula- dores eléctricos, empleados en fábricas de pinturas, fabricantes de balas, etc. Y en forma indirecta aquellos individuos que se encuentran en un medio ambiente rico en plomo, como el caso de agentes de gasolinas, de transito que permanecen ex- puestos a partículas emitidas por vehículos o por la combustión. Creemos que se hace necesario hacer estudios que evalúen este tipo de problema para que eso conlleve a crear condiciones de desarrollo favorables que no vayan en contra de la salud Justificación Profesional Es requisito indispensable que los profesionales de la salud deban atender y tengan el conocimiento del uso de herramientas válidas como la técnica de Hoesch para confirmar la presencia de plomo en orina de los trabajadores expuestos laboral- mente mediante la enzima Acido delta amino-Urinario positivo, y así poder obtener una mejor proyección de lo serio que es el problema "el plomo" como contaminante y de sus efectos en el organismo. 6 4. OBJETIVO 4.1. OBJETIVO GENERAL Identificar la presencia de plomo mediante la técnica de Hoesch, para descartar o confirmar la presencia de la enzima acido delta aminolevulinico deshidrastasa en la orina de los trabajadores de la Estaciones de Servicio de Gasolina, y así evaluar la situación actual. 4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS Demostrar mediante la técnica HOESCH la presencia de plomo en orina. Verificar si el tiempo de trabajo influye en las pruebas positivas para Delta- ALA. Observar si existen medidas de seguridad para con los trabajadores. 7 5. MARCO TEORICO 5.1. PLOMO ORGANICO El plomo se combina con el radical alquilo formando compuestos alquílicos de los cuales los únicos con importancia industrial en la actualidad son el plomo tetraetilo y el plomo tetrametilico. Son compuestos líquidos miscibles en todas las proporcio- nes con gasolina y otros disolventes orgánicos. El plomo es un metal pesado, crista- lino, de sabor ligeramente dulce, soluble en agua y extremadamente toxico. Desde comienzo de la civilización ha sido un aditivo en la manufactura de numerosos pro- ductos comerciales como: pinturas, tintes, soldaduras para envases metálicos, en algunos tipos de gasolina. Las evidencias de los estudios toxicológicos, bioquímicos y fisiológicos, demuestran que el plomo tiene efectos adversos en la salud humana. Los efectos tóxicos producidos por el plomo son conocidos desde hace más de 2000 años y a pesar de ello continua siendo un importante tema de salud pública en la mayoría de los países industrializados. En los países en desarrollo la intoxicación con plomo afecta a millones de niños y personas de otras edades y ha originado la realización de reuniones para implementar programas nacionales de prevención y diagnóstico. Las dos formas más frecuentes de intoxicación con plomo son: en ni- ños por exposición ambiental y en adultos por exposición ocupacional. En muchos lugares de trabajo se utilizan sustancias con plomo que pueden resultar riesgosas para la salud. 5.2 LA GASOLINA Y EL PLOMO Las gasolinas son los primeros combustibles líquidos que se obtienen del fracciona- miento del petróleo. Tienen componentes hidrocarbonados de C4 a C10ny una tem- peratura de destilación de entre 30 y 200 grados centígrados. Los principales com- ponentes que presenta son un amplio grupo de compuestos hidrocarbonados, cu- yas cadenas contienen hasta 10 átomos de carbono. Podemos tener en ella casi todos los componentes hidrocarbonados como: parafinas, cicloparafinas, ciclohexa- nica, ciclobencenicos. 8 Según la procedencia del crudo de petróleo, las fracciones gasolina pueden variar la composición. Dentro de una fracción gasolina, los 5 tipos de componentes que pue- den estar presentes son: Parafinas Ciclopentano Ciclohexano Benceno y sus derivados Las gasolinas son los primeros combustibles líquidos que se obtienen del fracciona- miento del petróleo. Tienen componentes hidrocarbonados de C4 a C 10 y una tem- peratura de destilación de entre 30 y 200 grados centígrados. 5.2.1. Clasificación Respecto a su procedencia: existen 3 clases de gasolinas. 5.2.1.1. Gasolina Naturales Es aquella que se produce por separación del gas natural o gas de cabeza de pozo. La composición de esta gasolina varía con respecto al gas natural que lo acompa- ña. El contenido en hidrocarburos es más bajo que la gasolina de destilación. 5.2.1.2. Gasolinas de Destilación Directa Fracción que se obtiene al destilar el crudo de petróleo a presión atmosférica. No contiene hidrocarbonados no saturados de moléculas complejas aromatico- naftenicas, puesto que presentan puntos de ebullición más altos que el límite supe- rior del intervalo de ebullición de la gasolina. 5.2.1.3. Gasolina de cracking o refinado Esta sale a partir de una fracción de corte alto que se somete a otro proceso, el que se rompen las moléculas más grandes en otras más pequeñas, obteniendo así mo- léculas que entran dentro de la fracción de la gasolina. 9 5.3. TETRAETILO DE PLOMO La gasolina cuando se utiliza en motores de combustión interna, el descubrimiento de que los aditivos de plomo modifican este comportamiento dio lugar al descubri- miento de la extensión del daño ambiental y de salud causados por el plomo. La hoja de datos de seguridad de materiales para la gasolina muestra al menos 15 productos químicos peligrosos presentes en diversas cantidades incluyendo el ben- ceno, tolueno, naftaleno, trimetilbenceno, metil terc-butil éter. La gasolina puede afectarle al inhalarla y al pasar a través de la piel. El contacto puede irritar y quemar la piel y los ojos, el contacto prolongado puede causar salpu- llido con piel seca y agrietada. Respirar la gasolina puede irritar la nariz y la gargan- ta y causar tos y respiración con silbido. A altos niveles puede causar dolor de cabeza, nausea, mareo, visión borrosa, lati- dos cardiacos irregulares, la exposición alta puede causar daño al pulmón y cere- bro. La gasolina podría causar daño al riñón, es un líquido inflamable y presenta pe- ligro de incendio. A menudo contiene plomo y benceno . 5.3.1. Valores Límites de Exposición Son aquellos que no deben en ningún caso ser superados y a partir de los cuales debe alejarse al trabajador del puesto habitual y de la exposición en general. El va- lor límite de la concentración ambiental de plomo se establece en 150 ug/m3 de aire referido a 8 horas diarias y 40 semanales. 5.3.2. Maneras de reducir la Exposición Use ropa de trabajo protectora. Lávese inmediatamente después de la exposición a la gasolina y al final del turno laboral. Exhiba información sobre los peligros y advertencias en el área de trabajo. El área de trabajo debe esta provista de lavaojos para uso de emergencia. No coma, fume o beba donde se manipula, procesa o almacena gasolina. 10 5.4. DEFINICIÓN DEL PROBLEMA 5.4.1. Trabajador Expuesto Se considera expuesto al riesgo de plomo a todo trabajador que durante más de 30 días al año ejerce su actividad laboral en un ambiente con una concentración am- biental de plomo (Pb) superior o igual a 40 µg/m3 de aire, referido a 8 horas diarias y 40 semanales; en relación al nivel de plumbemia, aquél que presenta un valor de plomo en sangre (Pb-B) mayor o igual a 40 µg/100 ml de sangre en el caso de los hombres y 30 µg/100 ml de sangre en el caso de las mujeres en periodo fértil. 5.4.1.1. Usos y fuentes de exposición al plomo El plomo y sus compuestos pueden entrar en el medio ambiente en cualquier punto durante las actividades de fabricación de baterías, aditivos de la gasolina, produc- tos para soldar, esmaltes cerámicos y la cristalería de mesa. En la actualidad se utilizan en la protección de materiales expuestos como pigmentos para pinturas, electrodos de baterías, el tetraetilo y tetrametilo de plomo se utilizan como aditivos y antidetonantes de gasolinas contribuyendo a la contaminación ambiental. Las fundiciones de plomo, la fabricación y desarmado de baterías acido-plomo pa- ra vehículos de motor, constituye la principal fuente de intoxicación laboral en muestro medio. 5.4.1.2. Fuentes de Riesgo Las condiciones de dureza y maleabilidad del plomo han determinado un aumento progresivo en su utilización industrial. Las fuentes tradicionales de riesgo son: mi- nería, fundición, metalizado de plomo, temple acero, mantenimiento de túneles, acumuladores, industria del automóvil, industria química, pinturas, insecticidas, el uso en gasolineras, y fabricación de municiones. 5.5. MECANISMO DE ACCIÓN 5.5.1. Toxicocinetica del Plomo 5.5.1.1. Vías de Penetración 5.5.1.2. Vía respiratoria 11 Es la vía de entrada más importante, penetrando por inhalación de vapores, hu- mos y partículas del polvo. El 50% del Pb depositado en los pulmones se encuen- tra en sangre circulante tras aproximadamente 50 horas, pasando un porcentaje a tejidos o siendo eliminado. 5.5.1.3. Vía oral Las partículas de polvo de plomo son ingeridas directamente a través de las ma- nos, alimentos, bebidas o cigarrillos contaminados en el ambiente de trabajo. Constituye la segunda vía de entrada, en importancia, de plomo en el organismo. Hay también un porcentaje de plomo que después de haber sido inhalado es pos- teriormente vertido al tubo digestivo por los mecanismos de aclaramiento pulmo- nar. Del 5 al 10% del plomo ingerido por esta vía pasa a sangre, siendo el resto eliminado por las heces. Por otra parte la absorción de plomo por esta vía es más elevada en la mujer que en el hombre. No respetar las reglas de higiene en el lu- gar de trabajo (comer, beber o fumar), así como deficiencias en la higiene personal y/o deficiencias en las instalaciones sanitarias en la empresa pueden tener como consecuencia una entrada importante del tóxico por esta vía 5.5.1.4. Vía cutánea La absorción por esta vía es débil en el caso del plomo inorgánico al contrario que en el del plomo orgánico. Hay que señalar que la población no expuesta al plomo por razones laborales está más o menos en contacto continuo con este metal a través de la alimentación habitual o el ambiente urbano. 5.6. ALMACENAMIENTO EN EL ORGANISMO Una vez que el plomo pasa a la sangre se establece un intercambio dinámico entre los diferentes tejidos a los que el plomo se dirige. Estudios sugieren tres tipos de compartimientos que explica la distribución del plomo en el organismo humano. 5.6.1. Absorción El plomo absorbido pasa al hígado y se excreta en parte por bilis, en el adulto se calcula que puede contener más de 300ug de plomo por día, del cual se absorbe un 10 %. Los niños pueden absorber hasta el 50% del plomo ingerido. 12 5.6.2. Distribución El plomo en sangre se distribuye entre el plasma y el eritrocito. El plomo plasmático se distribuye tato en tejidos blandos (sangre, hígado, riñones) como en sistemas mineralizados (huesos, dientes). La distribución del plomo en los tejidos se ex- plica en tres compartimientos con vida media en sangre (36 días), tejidos blandos (40 días), hueso (27 años). 5.6.3. Excreción El plomo es eliminado del cuerpo a través de la orina y las heces, bajo condiciones de exposiciones constantes a bajas concentraciones de plomo se alcanza un equili- brio entre la entrada y la salida del plomo del organismo. En estas condiciones el plomo excretado por vía renal representa el 70% del plomo absorbido. 5.7. EFECTOS SOBRE LA SALUD Aunque el plomo es uno de los metales de utilización más antiguo de su acción to- xica es todavía imperfectamente conocido y sigue siendo objeto de números estu- dios. Los efectos de la toxicidad del plomo en el organismo son: Apoptosis Citotoxicidad Metabolismo energético disminuido Alteración de la síntesis del hemo y anemia Estrés oxidativo Coeficiente intelectual disminuido Alteración de la función neuropsicológica 5.7.1. Efectos sobre el Tejido Hematopoyético La concentración de plomo en la medula ósea, conduciría a la alteración de la ma- duración de los glóbulos rojos que este metal produce. 13 5.7.2. Inhibición de la síntesis del Hem en los Eritroblastos El plomo bloquea varias enzimas para la síntesis del grupo Hem de la hemoglobi- na: delta-ALA-Deshidrastasa, coproporfirinogeno III, descarboxilasa y ferroquelasa. Estos efectos dependen de la dosis de absorción, siendo la más temprana la inhibi- ción del ALA-D. Las consecuencias biológicas de inhibición son: Aumento de la tasa de ALA en sangre y en orina. Aumento de la concentración de coproporfirinogenoIII. Aumento de las protoporfirina. 5.7.3. Efectos sobre los glóbulos rojos circulantes La fragilidad de los glóbulos rojos parece aumentar, la vida media de los glóbulos rojos disminuye ligeramente, este hecho explica la anemia saturnina entre las anemias hemolíticas. 5.7.4. Efectos sobre el Sistema Nervioso El plomo es un neurotóxico periférico y central, interfiere en la liberación de la ace- tilcolina, sus efectos descritos son: desde no videntes o limitados a una reducción de los rendimientos globales del cuerpo o alteraciones de las funciones psíquicas. 5.7.5. Efectos a nivel Renal Se distinguen tres fases en la respuesta renal a una exposición prolongada al plo- mo: Primera fase (de duración inferior a un año): caracterizada por la presencia de inclusiones intranucleares del complejo plomo-proteína en las células tubula- res, excreción elevada de plomo; no hay todavía perturbación de la función renal. Segunda fase: tras algunos años de exposición las células tubulares han per- dido la capacidad de formar inclusiones intranucleares. Los riñones excretan menos plomo y presentan un cierto grado de fibrosis intersticial. La función renal comienza a alterarse. 14 Tercera fase: se produce una nefritis crónica. La lesión es principalmente tu- bular si bien puede afectar también a nivel glomerular. 5.7.6. Efectos sobre la Reproducción El plomo puede ser transmitido de la madre al feto por transferencia placentaria es- tando expuesto a casi la misma concentración de plomo que la madre. A este nivel se ha descrito un aumento de abortos espontáneos, así como el aumento de la ta- sa de morbi-mortalidad en recién nacidos. En el hombre ha sido observada hipoes- permia como efecto del plomo. 5.7.7. Efectos sobre el Sistema Cardiovascular Un aspecto interesante constatado en los últimos estudios es la relación causal en- tre bajos niveles de exposición e hipertensión arterial. También se ha encontrado mayor riesgo de mortalidad por enfermedades cardiovasculares en trabajadores expuestos a plomo. Las alteraciones cardiacas pueden producirse por tres mecanismos: Hipertensión arterial por afectación renal primaria Aumento de las resistencias periféricas por alteración de la pared de los va- sos sanguíneos Por infiltración celular en el tejido específico de conducción 5.8. MANIFESTACIONES CLINICAS 5.8.1. Intoxicación aguda Es muy difícil observarla actualmente en la industria de nuestro medio. Los síntomas son: A nivel del aparato digestivo: cólico saturnino con dolor, vómitos y estreñi- miento. A nivel del sistema nervioso: encefalopatía saturnina con convulsiones y coma que conduce a la muerte en dos o tres días. También puede presentarse en forma de delirio o psicosis tóxica. A nivel renal: albuminuria, cilindruria, oliguria. 15 5.8.2. Intoxicación crónica Es la que podemos encontrar en la industria. 5.9. FORMACION DEL ACIDO DELTA-AMINOLEVULINICO El ALA se forma a partir del aminoácido glicina o glicocola y succinilcoenzima- (CoA), procedente del ciclo de Krebbs. Shemin y Rittenberg demostraron en 1945, que la glicocola era precursor del hemo, marcándola primero con 15 N y después con 14C. En el laboratorio de Shemin , mediante el uso de 14C, demostraron el papel de la succinil CoA. La síntesis de ALA está catalizada por la enzima delta-amino-levulínico-. sintetasa (ALA-S). Esta enzima mitocondrial, que presenta un grupo sulfhídrico en su sitio activo, necesita fosfato de piridoxal como cofactor y es muy específica para su substrato, succinil CoA. Se postula que el mecanismo de acción del ALA-S con- siste en la formación de una base entre la glicocola y la enzima unida al fosfato de piridoxal. Al condensarse la base con succinil Coa, se forma un compuesto inesta- ble, ácido alfa-amino-13-cetoadípico, se decarboxila y se obtiene ALA. 5.10. FORMACION DEL PORFOBILINOGENO El PBG se obtiene por la condensación de dos moléculas de ALA con perdida de dos moléculas de agua, reacción catabolizada por la enzima delta-amino- levulinico deshidrastasa (ALA-D) . El ALA-D es una enzima citoplasmática, por tanto el ALA una vez formado en la mitocondria difunde al citoplasma. En el centro activo de la enzima se encuentran grupos sulhidrilos, un átomo de Zn por subunidad enzimática, 1 o 2 residuos de lisina, 1 residuo de histidina y restos de aminoácidos hidrofobicos. El ALA-D es inhibido por concentraciones muy bajas de los bloqueantes de los grupos sulfhidrilos, como metales pesados (plomo, mercurio, cadmio) y otros reactivos como p-cloro-mercuri-benzoato. Es activada por la presencia de ciertos cationes como zinc, cobre y aluminio que probablemente protegen los grupos sulf- hidrilos, imprescindiblemente para la actividad enzimática. 16 5.10.1. Porfirias y Porfirinopatias Se denominan porfirias al grupo de enfermedades metabólicas causadas por un error congénito en el metabolismo porfirinico, con hipoactividad de una de las enzi- mas que intervienen en la ruta biosintética del hemo. Las porfirinopatias son alteraciones en el metabolismo de las porfirias secundarias a: Enfermedades que afectan a la medula ósea o al hígado, donde se sintetiza la mayor parte del hemo, afectación de la vía biliar o del riñón, órganos encargados de la excreción de porfirias y precursores. La administración de tóxicos que alteren la ruta del hemo como metales pesados. 5.10.1.2. Porfirinopatias La intoxicación por plomo produce incremento en la eliminación urinaria de ALA así como elevación de protoporfirina eritrocitica. Las alteraciones bioquímicas son causadas por la inhibición que el plomo produce en la actividad de la enzima ALA-D, Coprogeno, y ferroquelasa. El consumo de etanol ejerce un efecto transitorio en la biosíntesis del hemo, inhibe las enzimas ALA-D, URO-D y ferroquelatasa. Se ha descrito que algunos fárma- cos como la clorpromazina, la amitriptilina, o la carbamazepina son capaces de in- hibir la actividad de la enzima ALA-D. 5.11. INDICADORES DE EFECTO 5.11.1. Deshidratasa Eritrocitaria del Ácido Delta Aminolevulinico (ALA-D) Este enzima es especialmente sensible al plomo, que ejerce sobre él una precoz acción inhibitoria, produciéndose como consecuencia una acumulación de ALA. La reducción de la actividad de este enzima precede a todas las demás alteraciones metabólicas. El organismo parece disponer de una reserva importante de este enzi- ma y es necesario que la acción inhibitoria afecte al menos a un 80 % de esta reser- va para que su sustrato, el ALA, comience a acumularse y aumente su excreción en orina (ALA-U). El ALA-D podrá no solamente ser inhibido por la acción directa del plomo, sino también por intermediarios de la vía metabólica del Hem (coproporfirinógeno, protoporfirina IX) por mecanismo «feed-back». 17 5.11.2. Acido Delta Aminolevulinico Urinario (ALA-U) El ácido delta amino levulinico es el precursor de las porfirias, uroporfirias, copro- porfirias. En la porfiria por intoxicación por plomo se origina un trastorno de la con- versión a porfobilinogeno elevando los niveles de ALA. La acumulación de ALA y posterior aumento de la excreción urinaria del ALA-U se produce como consecuencia de la inhibición del plomo sobre el ALA-D y la estimu- lación del ALA-sintetasa. La excreción urinaria de este indicador está asociada a la cantidad de plomo metabólicamente activo en el organismo. En los trabajadores con exposición al plomo relativamente estable, la cantidad de ALA-U es proporcional a la concentración de Pb-U. El ALA-U aumenta algo más tardíamente que las protoporfirinas eritrocitarias. La actuación de la enzima aminolevulinico-sintasa da lugar a la formación del áci- do delta ALA. La enzima ALA deshidrastasa permite que dos moléculas de ALA formen el denominado porfobilinogeno, estos dos compuestos ALA y PGB son los llamados precursores de las porfirias y su presencia en orina. La concentración urinaria del ALA es el mejor indicador de intoxicación por plomo y su medición ha sido extensamente usada para la vigilancia médica de los trabaja- dores expuestos ocupacionalmente al plomo. Esta enzima ayuda en la conversión del ALA a porfobilinogeno, como resultado de la intoxicación por plomo el ALA se acumula en la sangre y en la orina. Como precursor básico de las porfirias, el delta-ala es necesario para la produc- ción normal de porfobilinogeno, que finalmente conduce a la síntesis del hemo en las células eritroides. Los trastornos genéticos (porfirias) se asocian con la ausen- cia de una determinada enzima esencial para el metabolismo del hemo. Estos tras- tornos se caracterizan por la acumulación de los productos de la porfirias en el hí- gado o en los eritrocitos. 18 5.11.2.1. Tipos de enzima ALA Enzima ALA-Sintasa, la primera enzima de la vía biosintética del hemo, cata- liza la condensación de glicina y succinil-coenzima A para formar ALA. La enzima está localizada en la membrana interna de las mitocondrias y requie- re piridoxal-5'-fosfato como cofactor. Enzima ALA- deshidratasa, una enzima citosólica, convierte dos moléculas de ALA en un monopirrol, el PBG, con eliminación de dos moléculas de agua. El plomo inhibe la actividad de la ALA-deshidratasa desplazando al cinc (el metal esencial para la actividad enzimática) de la enzima. Enzima PBG-desaminasa cataliza la condensación de cuatro moléculas de PBG para producir un tetrapirrol, el hidroximetilbilano (HMB). Hay dos isoen- zimas de la PBG desaminasa; una está presente exclusivamente en las célu- las eritroides, mientras que la otra se encuentra en células no eritroides. Las dos isoformas de la PBG-desaminasa son codificadas por distintos ARN mensajeros (ARNm) que son transcritos a partir de un solo gen mediante transcripción alternada, corte y acoplamiento. 5.12 DETERMINACION DE PLOMO EN ORINA 5.12.1. Determinación de Porfobilinogeno en Orina Se utiliza como muestra la orina recolectada en las condiciones correspondientes a la determinación ya que el plomo se polimeriza en medio acido dando uroporfi- ria. En un tubo pequeño a 2ml del reactivo de Erlich (2 g de p-dimetil aminobenzal- dehido en 50 ml de HCl y 50 ml de agua destilada), se agregan 1 a 2 gotas de ori- na. Al cabo de 2 segundos un desarrollo de color rosado al tope de la solución in- dica un test positivo para PBG. El color amarillo que se observa a veces se debe a compuestos como urea y Urobilinogeno que no desarrollan color en condiciones hasta una concentración de 200mg. En una intoxicación con plomo se encontraran valores de PBG en orina normales o disminuidos. Si se hallaran valores aumentados, seria indicio que la porfirias manifestada es de otra naturaleza, por ejemplo tipo congénito . 19 5.12.2 Determinación de Acido Delta amino-levulinico (DELTA-ALA) en orina La reacción se fundamenta en la reacción del Delta-ALA con acetil acetona dando un compuesto pirrolico (2metil, 3 acetil – pirrol) que condensa luego con el reactivo de Erlich originando un compuesto rojo que se determina. Muestra Orina correspondiente a 24hrs recolectada en frasco oscuro. Reactivos Reactivo de Erlich modificado = 1 gr de p-dimetil aminobenzaldehido se di- suelve en 35 ml de ácido acético glacial, se agrega 8ml de ácido perclórico 70 % y se lleva a 50 ml con ácido acético glacial. 5.13. FACTORES QUE PUEDEN MODIFICAR LOS RESULTADOS Entre los fármacos que pueden producir un aumento de los niveles de ALA se en- cuentran: penicilina, barbitúricos, y griseofulvina. 5.13.1. Resultados anormales 5.13.1.1. Niveles Aumentados Porfiria Intoxicación por plomo Trastornos por alcoholismo crónico Cetoacidosis diabética 5.13.1.2. Acido delta aminolevulinico en la orina (ALA-U) Es un indicador de efecto, tiene relación con el plomo. Indicador especifico de la exposición actual del plomo. Adecuado en la vigilancia de trabajadores expuestos. 5.14. SÍNTOMAS La mayoría de los pacientes con PAI no presentan síntomas (fase latente) hasta que la fase aguda se manifiesta debido a la medicación y otros factores. 20 La fase aguda destaca por los síntomas de dolor abdominal y muscular, nauseas, vómitos, hipertensión, síntomas mentales (ansiedad, insomnio, alucinaciones y pa- ranoia), y retención urinaria. La anemia hemolítica también puede aparecer con la crisis aguda, estos síntomas se asocian con un aumento de los niveles séricos y urinarios de precursores de la porfirias (ácido aminolevulinico, porfirias y porfobili- nogeno). En el aparato gastrointestinal, puede presentar anorexia, dolor abdominal, cólicos, vómitos intermitentes y constipación. El cólico saturnino es un cuadro típico de in- toxicaciones plúmbicas. Los músculos del abdomen se vuelven rígidos y doloro- sos. Efectos neurológicos, como ser: neuropatías, cefaleas, insomnio, inquietud e irritabilidad. 21 6. HIPOTESIS Existe la presencia de la enzima Acido Delta Aminolevulinico-deshidrastasa en la orina de los trabajadores mayores de edad de la Estación de Servicio de Gasolina, utilizando la técnica de Hoesch para comprobarlo. 7. VARIABLES 7.1. Variables dependientes Estación de servicio de gasolina Presencia de plomo en orina Técnica del HOESCH 7.2. Variables independientes Trabajadores mayores de edad 22 8. DISEÑO METODOLOGICO DE LA INVESTIGACION 8.1. TIPO DE INVESTIGACION TRANSVERSAL Está centrada en identificar inhibición de la enzima delta-ALA en los meses de Agosto a Diciembre del 2014. EXPERIMENTAL Se caracteriza en la aplicación de la técnica de Hoesch para determinar si hay presencia del plomo, como estudio experimental. ANALITICO Este proceso incluye la preparación de las muestras de orina, siguiendo el procedi- miento para delta-ALA, y así ser sometidos a la determinación del plomo. 8.2. UNIVERSO Y MUESTRA 8.2.1. UNIVERSO Todos los trabajadores que manipulan el combustible de gasolina en las 7 Estacio- nes de Servicio de Gasolina de la zona de la doble vía la guardia de la ciudad de Santa Cruz. 8.2.2. MUESTRA Se trabajó con las muestras de orina de 40 Trabajadores mujeres de 5 Estaciones de Servicio de Gasolina que están en contacto con la manipulación de gasolina Pre- mium. 8.3. INSTRUMENTOS Para realizar este estudio se utilizan diferentes equipos y materiales. - Equipos Cocinilla Balanza analítica -Materiales Tubos de ensayo Vaso precipitado100ml Vaso precipitado 50ml Probeta 100ml 23 Espátula Vidrio reloj Goteros Propipetas Micropipetas 500ul punteras Gradillas Pipetas 5ml Pipetas 10ml Termómetro 8.4. PROCEDIMIENTO Recolección de muestra Preparación de la muestra Técnica de Hoesch Técnica Hoesch Modificado 24 8.4. CRITERIOS DE INCLUSION - EXCLUSION 8.4.1. CRITERIOS DE INCLUSION Se consideran a todos aquellos que laboran desde los 1 año en adelante, por las horas de exposición, su ingesta diaria y su indumentaria de protección, lo cual influyo en el proceso de la presencia de ALA positivo como biomarcador de plo- mo en orina. 8.4.2. CRITERIOS DE EXCLUSION No se incluyeron a aquellos que trabajan menor a los 1 año, porque cumplie- ron con los factores de protección e ingesta diaria. 25 FLUJOGRAMA DE PROCESOS TECNICA DE HOESCH RECOLECCION DE LA MUESTRA ENTREGAR RECIPIENTE PARA LA ORINA INDICAR AL PACIENTE ORINA DE 24HR CONSERVAR LA ORINA EN HIELO/24HRS CONSERVAR LA MUESTRA/ DE LA LUZ TRASLADO DE LA MUESTRA/ RAPIDO REGISTRO DE CADA MUESTRA INDICANDO NOMBRE/EDAD/SEXO/COD. ENCUESTA CALCULOS PREPARACION DE REACTIVOS TEST CON LA TIRA REACTIVA PRUEBA DE HOESCH/ALA SI PUEDE O NO AFECTAR/RESULTADOS REGISTRO DE RESULTADOS AÑADIR 3ML RVO + 3ML ORINA 26 ESPERAR DURANTE 3 A 5 MINUTOS ANOTAR SI HAY CAMBIO DE COLOR AÑADIRR ACETATO SODIO Y BUTANOL CENTRIFUGAR DURANTE 10 MIINUTOS ANOTAR CAMBIOS DE COLOR POSITIVOS LOS TUBOS DE COLOR ROJO PRUEBA DE HOESCH POSITIVO 27 Tabla de contingencia ALA * TURNO Recuento TURNO Total UN TURNO DE 6 HORAS UN TURNO DE 8 HORAS UN TURNO DE 12 HO- RAS DOS TUR- NOS ALA si 5 3 5 5 18 no 14 4 4 0 22 Total 19 7 9 5 40 Tabla y Grafico N1Presencia de ALA de acuerdo a las horas de trabajo. 28 Tabla de contingencia ALA * DIARIA Recuento DIARIA Total NIVEL TRES- LACTEOS NIVELCUA- TRO- PROTEINAS NIVEL CINCO- GRASAS Y EMBUTIDOS NIVEL SEIS Y SIETE- GRASAS ALA si 0 3 11 4 18 no 15 2 4 1 22 Total 15 5 15 5 40 Tabla y Grafico N2 Presencia de ALA de acuerdo a la Ingesta Diaria de Alimen- tos. 29 Tabla de contingencia ALA * TIEMPO DE TRABAJO Recuento TIEMPO DE TRABAJO Total MEDIO AÑO 1 AÑO 2 AÑOS 3 AÑOS 4 AÑOS EN ADELANTE ALA si 0 7 4 4 3 18 no 12 2 4 2 2 22 Total 12 9 8 6 5 40 En la tabla del grafico número 3 se observan el tiempo de exposición de los trabaja- dores, y las muestras que dieron positivo por año. Como muestra en la tabla el máximo incremento por año de laborar es de 7 mues- tras en más de 1año de trabajo. Esto puede deberse a diversos factores, como ho- ras trabajadas, ingesta diaria, y la exposición de su organismo al plomo. Tabla y Grafico N3 Presencia de ALA de acuerdo al Tiempo de trabajo. 30 Tabla de contingencia PROTECCION * ALA Recuento ALA Total si no PROTECCION SI 8 14 22 NO 10 8 18 Total 18 22 40 Tabla y Grafico N4 Presencia de ALA de acuerdo a la Indumentaria de protec- ción. 31 Tabla de contingencia PROTECCION * TIEMPO DE TRABAJO Recuento TIEMPO DE TRABAJO Total MEDIO AÑO 1 AÑO 2 AÑOS 3 AÑOS 4 AÑOS EN ADELANTE PROTECCION SI 9 6 4 1 2 22 NO 3 3 4 5 3 18 Total 12 9 8 6 5 40 Tabla y Grafico N5 Comparación entre la Indumentaria de protección en relación al tiempo de trabajo. 32 Tabla y Grafico N6 Síntomas según la presencia de ALA. Se consideró el total de las muestras para relacionarlo con los síntomas que más presentaron los empleados, entre ellos está el dolor abdominal, con signos de cólicos abdominales que tienen una aparición periódica durante días acom- pañados de constipación. Existen otras manifestaciones como: dolor muscular porque el plomo es un contractor de toda musculatura lisa, entre otros síntomas están el insomnio y retención urinaria en menor presencia en los empleados, pero no de menor importancia en la salud. Tabla de contingencia ALA * presenta algún síntoma Recuento presenta algún síntoma Total dolor muscu- lar dolor abdomi- nal Insomnio retención urinaria todos ninguno ALA Si 5 6 4 2 1 0 18 No 7 6 5 3 0 1 22 Total 12 12 9 5 1 1 40 33 11. CONCLUCION Las pruebas realizadas corroboraron que la presencia de plomo en orina de los tra- bajadores de las Estaciones Servicio de Gasolina fueron positivas en 18 muestras de las 40 realizadas, esto significa que se demostró mediante la técnica de HOESCH como prueba colorimétrica la presencia de este metal . Se verifico las pruebas positivas y su relación con el tiempo de exposición, es decir por los años trabajados en la estación de servicio de gasolina. Por tanto la determinación de la actividad de la enzima delta-aminolevulinico deshi- drastasa es el método más indicado para el diagnóstico rápido y seguro de la pre- sencia de plomo en orina. Y por ultimo no se observo las medidas de seguridad para con los trabajadores, el cual requiere una acción correctiva inmediata. 34 12. RECOMENDACIONES La recomendación que se consideró pertinente es en tres áreas: Educación Ambiental para los trabajadores Evaluación integral en los trabajadores, para la detección y tratamiento especí- fico. Educación sobre toxicidad del plomo y promoción de hábitos saludables, dieta alimentaria e higiene. Prevención de riesgos ambientales, seguridad laboral. Acciones de Salud Pública Con el fin de disminuir el riesgo a la exposición de sustancias toxicas, es iden- tificar las agencias o direcciones gubernamentales que sean responsables de velar por la seguridad ambiental. Estudiantes y profesionales en Salud Bolivia carece de investigadores científicos en materia de salud y seguridad en el trabajo, la no existencia de un sistema de vigilancia en esta temática hace que este factor agrave el problema. Realicemos intervenciones puntuales, la falta de investigación y de educación en la población, hacen que en los lugares de trabajo que se utiliza plomo, se ponga en riesgo la salud del trabajador como también la salud de la población en general. 35 13. BIBLIOGRAFIA. Fuentes Primarias GILBERTO ANGEL MEJIA, MAURICIO ANGEL RAMELLI. Interpretacion Clini- ca de laboratorio. 7ma edición-2006 Bogota /Pag.8.Editorial medica paname- ricana KATHLEEN DESKA PAGANA. Guía de pruebas diagnósticas y de laborato- rio/8va edición-2008 Barcelona España. RR LAUWERYS. MASSON. Toxicología Industrial y Envenenamiento Ocupa- cional/ 2da edición Editorial. París 1982. ALESSIO L, PIRAZO APÓSTOLES, 3ra edición-2010 Italia. Protocolo Para el Seguimiento y la Vigilancia Salud de los Trabajadores Expuestos a Plomo Or- gánico. FERNANDO RAINOLDI.LEDA GIANNUZZI Y CRISTHIAN OLIVER. 1ra edi- cion-2011 Cap. 8 Buenos Aires Argentina.Manual de Tecnica Analiticas en el laboratorio de Toxicologia. TSUKAMOTO 1, YOSHINAOA T, SANO : Evidence for histidine as another functional group of delta-aminolevulinic acid dehydratase from beef liver. Bio- chem. Biophys. Res. Commun. 1975. pag. 294-301. CAMPBELL BO, BRODIE .MJ, THOMPSON GO, MEREDITH PA, MOORE MR, GOLBERG A: Alteractions in the activity of enzymes of haem biosynthesis in lead poisoning and acute hepatic porphyrias. Clin. Sci. Mal. Med. 1977. pag. 535. MOORE MR: The effect of ethanol in haem biosynthesis. Praceeding of the lst international symposium on alcohol and aldehyde metabolishing system. Estocolmo. 1973. pag.21-24. McCOLL KEL, THOMPSON OG, MOORE MR, GOLBERO A: Acute ethanol ingestion and haem biosynthesis in healthy subjects. Eur. J. Clin. lnvest. 1980. pag.107-112. Fuentes Secundarias www.scielo.org.pe/scielo.php?script=s www.sertox.com.ar/modules.php?name www.Es.cribd.com/mobile/doc/166256997?width www.Centrodeartigo.com/artículos-enciclopedicos www. Hoja informativa sobre sustancias peligrosas 1 ANEXO-I 2 3 4 5 ANEXO-II 6 Cuadro N1 Reactivos y Materiales para identificar ALA en orina. 7 cuadro N2 Identificación de la muestra y pesadas de Reactivo P-dimetil. 8 Cuadro N3 Preparación de Reactivo de Erlich. 9 Cuadro N5 Colocando el Reactivo de Erlich en cada muestra de orina. 10 Grafico N7 Realizando la segunda 11 12 13 14