DETERMINACI ÓN CUALITATIVA DE CARBOHIDRATOSFacultad de Ciencias Básicas, Escuela de Ciencias Químicas, Programa Química de Alimentos, Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, Tunja 27 agosto – 2009 Laura María Ibarra 1134132, Eliana Maritza Tulcán 1134203 María Lourdes Quintero 1134119
[email protected] Profesora. Ruby Marques ABSTRACT The carbohydrates are distributed widely in vegetables and animals in which it has structural participation, functional and metabolic. The carbohydrates are classified depending on I number of atoms of carbon that have and the aldehic function or cetonic, these as well confer the base to him for majority of reactions used for their identification. carbono (pentosa) o de seis átomos de carbono (hexosa), INTRODUCCIÓN Los carbohidratos son polihidroxialdehidos y polihidroxicetonas derivados de alcoholes. Se clasifican de acuerdo al número de carbonos que contiene la cadena (triosas, tetrosas, pentosas, etc.) y de acuerdo al número de monómeros que posea la molécula (monosacáridos, disacáridos, polisacáridos, etc.). Los carbohidratos, conocidos generalmente como azucares, son de los compuestos orgánicos más abundantes en la naturaleza, la mayoría de ellos proceden de las plantas y solo unos cuantos son de origen animal. Las propiedades químicas y físicas de los carbohidratos varían de acuerdo a su composición, por lo que se han diseñado pruebas específicas para su detección y cuantificación, además de reconocer si un compuesto pertenece a la familia de los carbohidratos, es necesario diferenciar si se trata de un monosacárido tipo aldosa o cetosa, si es fácilmente oxidable o no, es decir si es un AZÚCAR REDUCTOR o no lo es, si es de cinco átomos de si es disacárido o polisacárido. METODOLOG ÍA Para la determinación cualitativa se realizó las siguientes pruebas: 1. PRUEBA DE MOLISH CARBOHIDRAT OS Sacarosa Glucosa Arabinosa Xilosa Albúmina 2. PRUEBA DE BENEDICT CARBOHIDRAT O REACTIVO DE BENEDICT (mL) H2SO4 (mL) 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 mL CH 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0 1.5 Fructosa 1.0 Xilosa 1. 4.0 Fructosa 1. cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. PRUEBA DE BENEDICT Sacaros Arabino Glucosa a sa Xilosa Albúmin a 3.0 1.0 Los tubos se sometieron a baño termostatado a 98°C. hasta que se observe un cambio de color.0 1. PRUEBA DE MOLISH Sacaro Glucos sa a Arabino sa Xilosa Albúmi na Al 2. PRUEBA DE BARFOED Se tomó 1mL de glucosa.0 Sacarosa 1. PRUEBA DE LUGOL CARBOHIDRAT Lugol mL CH OS (mL) Glucosa 1. 3.5 Lactosa 1.0 0.0 Los tubos se sometieron a baño termostatado a 98°C.0 Reactivo Sellivanoft (mL) 1.0 0.0 1. PRUEBA DE BIAL CARBOHIDRAT Reactivo de mL CH OS Bial (mL) Glucosa 1.0 DATOS 1.5 Se observó el cambio de color inmediatamente se agregó. Al cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. 5.0 1.0 1.0 Lactosa 1.0 1. almidón y sacarosa en diferentes tubos y se agregó a cada uno 1mL de reactivo de Barfoed.0 1. 6.0 Arabinosa 1.0 1. lactosa.Glucosa Fructosa Lactosa Almidón 1.0 0. PRUEBA DE SELLIWANOFF CARBOHIDRAT mL CH OS Glucosa 1.0 Los tubos se sometieron a calentamiento en baño termostatado a 98°C. cabo de 5 minutos se observó el cambio de color. Al Sacarosa 1.0 Sacarosa 1.0 0.0 1.0 Fructosa 1. fructosa.5 Sacarosa 1.0 1. PRUEBA DE BARFOED Sacaros Arabino Glucosa a sa Xilosa Albúmi na . Los tubos que contenían sacarosa. en el caso de la sacarosa no reaccionan porque esta prueba también diferencia monosacáridos de polisacaridos. respectivamente. Esta reacción produce un anillo violeta. Para el caso de la glucosa se formo un hidroxifurfural y con la arabinosa se formó un furfural. 4. xilosa y albúmina son negativos. PRUEBA DE BIAL Sacaros Glucosa a Arabino sa Xilosa Albúmi na 5. PRUEBA DE LUGOL Sacaros Glucosa a Arabino sa Xilosa Albúmi na AN ÁLISIS DE DATOS Para el reconocimiento y diferenciación de carbohidratos se realizaron cinco pruebas cualitativas o coloreadas. y este carbohidrato es un disacárido unido por un enlace glucosídico. y la albúmina porque es una proteína. Para ésta prueba. que al ser delgado indica baja concentración de carbohidratos y si es grueso alta concentración de carbohidratos. los tubos que contenían glucosa y arabinosa presentaron un anillo color fucsia y violeta. PRUEBA DE MOLISH Esta prueba permite evidenciar los derivados furfúricos que se obtienen por deshidratación de los glúcidos. El H 2SO4 concentrado hidroliza enlaces glicosídicos para dar monosacáridos que pueden ser luego deshidratados dando furfural y sus derivados.indican el número de átomos de carbono y la presencia de grupos funcionales en cada uno. 1. Esta reacción es general para los hidratos de carbono pero algunos otros compuestos orgánicos dan también furfural con ácido sulfúrico concentrado. PRUEBA DE SELLIWANOFF Sacaros Arabino Glucosa a sa Xilosa Albúmi na 6. las cuales . Estos productos se combinan luego con α-naftol sulfonado originando un complejo purpura. evidenciando una prueba positiva para Molish. La xilosa no reaccionó posiblemente debido a la posición α del grupo hidroxilo del carbono 2. debido a que esta es una reacción para carbohidratos que contienen más de 5 átomos de carbono. verde o azul intenso lo que indica positivo para Barfoed. siendo en los tres casos positiva la prueba. el reactivo tiene acetato cúprico y ácido acético. ya que el calentamiento prolongado de algunas hexosas produce hidroximetilfurfural que también reacciona con orcinol dando complejos coloreados. que se evidencia por el cambio de color de azul a rojo. La fructosa que es capaz de dar positivo. almidón y sacarosa la reacción resulto positiva. 4. fructosa y sacarosa que son hexosas y reaccionaron mas tarde. PRUEBA DE BIAL Esta reacción diferencia las pentosas (glúcidos de 5 carbonos) de las hexosas (glúcidos de 6 carbonos).2. 3. Al agregar el reactivo toma una coloración azul intensa. La reacción no es específica para las pentosas. precipitándose el oxido cuproso de color rojizo y la solución sobrenadante es agua. y al someter a calentamiento torna rojo. a diferencia de la glucosa. aunque algunos disacáridos (los . Para las pruebas con lactosa. puesto que corresponden a disacáridos. PRUEBA DE BENDICT Esta reacción es específica para azúcares con grupo reductores libres (C=O). El fundamento radica en la reducción del acetato cúprico (3+) a oxido cuproso (2+). esta coloración depende del grupo al que este unido al carbohidrato. En las pruebas realizadas. pero con más tiempo de calentamiento. Cuando se calientan pentosas con HCl se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar una coloración verde azul. reaccionó primero la Xilosa y la arabinosa puesto que corresponden a pentosas. Estos azucares tornaron color azul claro y verdoso. Esto se pudo comprobar con los resultados positivos para la glucosa y fructosa. lo que ocurre por las condiciones en que se realiza la prueba: en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se tautomeriza (pasando por un intermediario enólico) a glucosa (que es capaz de reducir al ion cúprico). verde o azul claro. respectivamente. En el caso de los carbohidratos empleados: Lactosa. almidón y sacarosa (enlace α(1→1)O). en la reacción se forma el gluconato de cobre o gluconato cúprico que es una sal orgánica. PRUEBA DE BARFOED Es una reacción que permite diferenciar monosacáridos de disacáridos reductores. En el caso de la glucosa y fructosa la prueba es negativa puesto que estos carbohidratos son monosacáridos. resultan negativas puesto que sus OH anoméricos están siendo utilizados en el enlace glucosídico restándole reactividad a la molécula. reductores) dan positiva la reacción. identifica polisacáridos puesto que el almidón fue el único polisacárido que se empleo. darán positivas reacciones que involucren la participación de grupos aldehídos o cetonas. almidón y sacarosa resulto positivo debido a que son disacáridos con grupos reductores libres. La prueba de Selliwanoff diferencia cetosas de aldosas. La prueba de Benedict identifica azúcares con grupo reductores libres (C=O). La prueba de Bial diferencia pentosas de hexosas. llamándose azucares reductores. glucosa y sacarosa positivas para hexosas. Las pentosas se evidencian de color amarillo y las hexosas de color verde. que en la experiencia resultaron positivos para la glucosa y la fructosa con grupos reductores libres. México. BOHINSKI. La prueba de Barfoed identifica monosacáridos de disacáridos reductores. Bioquímica. Las cetosas se deshidratan más rápidamente que las aldosas dando derivados del furfural que se condensan con resorcinol para formar un complejo rojo. La prueba de Molish evidencia la presencia de monosacáridos como lo son la glucosa y arabinosa. Se empleó el almidón. en donde se emplea yodo el cual se introduce entre las espiras de la molécula en la hélice de la amilosa. como son el caso de la xilosa y arabinosa positivas para pentosas y fructosa. el cual se pierde cuando es calentado y se recupera cuando vuelve a temperatura ambiente. La prueba de lugol. Robert C.que se genera es debido a esta introducción. debido a que promueven la reducción del reactivo usado y ellos mismos se oxidan.A. En el caso de la fructosa esta prueba resulta positiva. PRUEBA DE SELLIWANOFF Esta reacción diferencia las cetosas (glúcidos con función cetona en carbono 2) de las aldosas (glúcidos con función aldehído en carbono 1). S. Se debe cuidar de calentar excesivamente la muestra que se está estudiando. la prueba resultó positiva. siendo positiva para la fructosa. puesto que es casi exclusiva para identificarla y además se trata de una cetosa que contiene 6 átomos de carbono. en el caso de la lactosa. generando un anillo color violeta. El color BIBLIOGRAF ÍA E INFOGRAF ÍA • . dando positiva para cetosas si torna color rojo y positiva para las aldosas si torna rosa tenue. Fondo educativo interamericano. CONCLUSIONES • Todos los disacáridos que posean un carbono anomérico libre. PRUEBA DE LUGOL Esta prueba permite identificar polisacaridos. 1992. • • • • • 6. • 5. dado que es una prueba casi exclusiva para identificar este monosacarido. Publicaciones http://www.wikipedia.• • • MERTZ. 1971. México.html http://www. Edwin T. S.net/hidrcarb.com/doc/2407201/GuiaBioquimica es. Bioquímica.dietasana.A. Cultural.org/wiki/Reacción_de_ Benedict • .scribd.